Peptídeos miméticos de antígenos de Strongyloides venezuelensis como nova ferramenta no diagnóstico da estrongiloidíase humana e no desenvolvimento de vacinas em modelo experimental

• Autor(a) principal: Sousa, José Eduardo Neto de
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/22388; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2018.480
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA::HELMINTOLOGIA DE PARASITOS; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA; Phage display; Estrongiloidíase humana; Human strongyloidiasis; Strongyloides venezuelensis; Diagnóstico; Diagnostic; Vacina; Vaccine; Imunologia; Estrongiloidíase

A estrongiloidíase é uma infecção parasitária em humanos causada por Strongyloides stercoralis e apresenta ampla distribuição geográfica com predominância em áreas tropicais e subtropicais. O diagnóstico é dificultado pela intermitente eliminação de larvas nas fezes e o grande número de indivíduos assintomáticos. Assim, a detecção de imunocomplexos no soro dos pacientes com estrongiloidíase pode ser uma estratégia para detectar infecção ativa precoce em pacientes com estrongiloidíase e o desenvolvimento de vacinas é uma ótima estratégia de saúde pública. O objetivo deste estudo foi utilizar a tecnologia de phage display para selecionar clones de fagos ligantes ao peptídeo sintético C10, aplicação desses ligantes na detecção de imunocomplexos em soros de pacientes com estrongiloidíase humana e verificar a utilização de peptídeos miméticos de antígenos de S. venezuelensis em formulações vacinais no controle da estrongiloidíase experimental. A seleção clones ligantes ao C10 foi realizada por phage display, posteriormente os fagos foram titulados e seus DNA sequenciados. Os clones C4 e G8 foram selecionados e utilizados na detecção de imunocomplexo por enzyme–linked immunosorbent assay (ELISA) em amostras de soro de pacientes com estrongiloidíase e na detecção de antígenos de S. venezuelensis por ELISA e reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Para avaliar o potencial vacinal foram realizadas duas imunizações com intervalo de 15 dias cada, seguidas de uma infecção desafio com larvas infectantes de S. venezuelensis (15 dias após a última imunização). Para imunização dos animais foram utilizados os peptídeos C9 e C10 expressos na superfície de bacteriófago M13 (fagos M13) e fagos M13 selvagens. Foram utilizados dois tipos de adjuvantes: hidróxido de alumínio (alúmen) e saponina. Titulações do soro foram realizadas durante todo o experimento para acompanhar a soroconversão dos títulos de IgG. Contagem de ovos por gramas de fezes (OPG) foi realizada durante os 21 dias de infecção. O fago C4 apresentou maior desempenho diagnóstico: sensibilidade de 83%, especificidade de 89% com AUC de 0,953 e índice de Youden 0,713. Ao comparar os resultados do 8º dia dos animais imunizados com os clones C9, C10 e a combinação ambos (C9 e C10) juntamente com alúmen, observou-se que as taxas de redução de ovos nas fezes foram de 50, 50 e 78%, respectivamente. Enquanto os ratos imunizados utilizando o adjuvante saponina a redução foi de 59, 55 e 80%, respectivamente. Os grupos imunizados com a combinação dos clones C9+C10 (alúmen e saponina) apresentaram maior redução de OPG. Conclui-se que a técnica de phage display foi eficiente na seleção de clones específicos ao peptídeo C10. Os fagos ligantes ao peptídeo sintético C10 detectaram imunocomplexo em amostras de soro de pacientes com estrongiloidíase com boa sensibilidade e especificidade. Os clones C4 e G8 reconhecem antígenos de S. venezuelensis. A imunização com fagos expressando tanto o peptídeo C9 quanto C10 com ambos adjuvantes foram eficientes na redução da carga parasitaria de S. venezuelensis em ratos experimentalmente infectados. Os peptídeos miméticos de antígenos de S. venezuelensis podem ser utilizados como nova ferramenta no diagnóstico sorológico da estrongiloidíase humana e no desenvolvimento de vacinas em modelo experimental.