Elucidação dos mecanismos de integração de minicírculos de kDNA de trypanosoma cruzi no genoma do hospedeiro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Moraes, Aline Silva
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/44972
Resumo: Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2022.
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spelling Moraes, Aline Silvaalinesilvamorares_df@yahoo.com.bHecht, Mariana Machado2022-10-03T21:56:11Z2022-10-03T21:56:11Z2022-10-032022-06-06MORAES, Aline Silva. Elucidação dos mecanismos de integração de minicírculos de kDNA de trypanosoma cruzi no genoma do hospedeiro. 2022. 132 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.https://repositorio.unb.br/handle/10482/44972Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2022.A doença de Chagas (DC), infecção tropical causada pelo parasita Trypanosoma cruzi (T. cruzi), afeta de 6 a 8 milhões de pessoas no mundo. Ainda não existe um tratamento adequado para a doença na sua forma avançada e a causa para síndrome chagásica severa não está muito bem estabelecida. Acredita-se que fenômenos de transferência lateral de minicírculos de kDNA (minikDNA) estejam envolvidos no desenvolvimento das manifestações clínicas e que vesículas extracelulares (VEs) de T. cruzi sejam o principal veículo de transferência dessas moléculas para o genoma da célula. Sabe-se que os minikDNA se integram preferencialmente em regiões de retroelemento LINE -1 e que sequências de minikDNA foram encontradas no genoma de células somáticas e de tecidos tais como o tecido cardíaco e do intestino. No entanto, ainda não foram descritos quais os tipos celulares mais permissivos à integração de minikDNA e quais os mecanismos envolvidos na dinâmica de integração dessas moléculas no genoma hospedeiro. Dessa forma, a análise de integração pelo método de quantificação de kDNA e nDNA por qPCR permitiu-nos verificar que diferentes linhagens celulares foram permissivas à integração de sequências de minikDNA, sendo as células HEK 293 e Caco 2 as mais permissivas. Verificamos também que VEs de T. cruzi contêm minikDNA na conformação de dupla fita. A infecção por T. cruzi em células HEK 293 aumentou a expressão de retroelemento LINE-1, principalmente às 72 horas pós-infecção. O uso de inibidores de transcriptase reversa inibiu a integração reforçando a hipótese de que os retroelementos LINE-1 têm um importante papel na integração do kDNA. Inibidores de vias de reparo, histona deacetilase (HDAC) e síntese de purina, também inibiram a integração do kDNA. Vale ressaltar que a expressão reduzida para os genes envolvidos nos mecanismos de checkpoint e vias de reparo no DNA, tais como p53, ATM, XP-A e XP-V, impediram a integração do kDNA. Assim, conclui-se que a integração do kDNA parece depender do pleno funcionamento da maquinaria de reparo do DNA. Desse modo, postulamos que a integridade das vias BER, NER, HR, NHEJ possa ter alguma relação com a permissividade à integração dos minicíruclos de kDNA, pois essas vias influenciam na atividade dos retroelementos.Chagas disease (CD), a tropical infection caused by the parasite Trypanosoma cruzi (T. cruzi), affects 6 to 8 million people worldwide. There is still no adequate treatment for the disease in its advanced form. Furtheremore, the cause for severe chagasic syndrome is not well established. It is believed that lateral transfer of minicircles of kDNA (minikDNA) are involved in the development of clinical manifestations and that T. cruzi extracellular vesicles (EVs) are the main vehicle for the transfer of these molecules to the cell genome. MinikDNAs preferentially integrate into LINE-1 retroelement regions and minikDNA sequences have been found in the genome of somatic cells and tissues such as heart and intestine. However, the most permissive cell types for minikDNA integration and the mechanisms involved in the dynamics of integration of these molecules into the host genome have not yet been described. Thus, the analysis of integration by the method of quantification of kDNA and nDNA by qPCR allowed us to identify different cell lines permissive to the integration of minikDNA sequences, with HEK 293 and Caco 2 cells being the most permissive. We also verified that T. cruzi EVs contain minikDNA in the double-stranded conformation. T. cruzi infection in HEK 293 cells increased LINE-1 retroelement expression, mainly at 72 hours post-infection. In addition, the use of reverse transcriptase inhibitors inhibited integration, reinforcing that LINE-1 retroelements play an important role in kDNA integration. Inhibitors of repair pathways, histone deacetylase (HDAC) and purine synthesis, also inhibited kDNA integration. It is worth mentioning that the reduced expression for genes involved in checkpointmechanisms and DNA repair pathways, such as p53, ATM, XP-A and XP-V, also prevented kDNA integration. Thus, the kDNA integration seems to depend on the perfect functioning of the DNA repair machinery. Thus, we postulate that the integrity of the BER, NER, HR, NHEJ pathways may have some relationship with the permissiveness to the integration of kDNA minicircles, as these pathways influence the activity of retroelements.Faculdade de Medicina (FMD)Programa de Pós-Graduação em Patologia MolecularA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessElucidação dos mecanismos de integração de minicírculos de kDNA de trypanosoma cruzi no genoma do hospedeiroElucidation of the mechanisms of integration of Trypanosoma cruzi kDNA minicircles into the host genomeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisTransferência de DNAMinicírculos de kDNAVesículas extracelularesReparo do DNAporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2022_AlineSilvaMoraes.pdf2022_AlineSilvaMoraes.pdfapplication/pdf8182557http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/44972/1/2022_AlineSilvaMoraes.pdf1bdd3fd99a56fd052653bd7da2a137b1MD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain671http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/44972/2/license.txtbacfee268cc5d4f6aaa2e6e0066d38f5MD52open access10482/449722024-02-29 10:33:56.542open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-02-29T13:33:56Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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