Análise funcional de proteínas de fusão de envelope de Alphabaculovirus e Betabaculovirus em células de inseto

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gomes, Suzane Suliane Vitorino Silva Ferreira
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/42202
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021.
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spelling Gomes, Suzane Suliane Vitorino Silva FerreiraMorgado, Fabricio da Silvasuuhgomes04@gmail.comRibeiro, Bergmann Morais2021-10-28T20:56:31Z2021-10-28T20:56:31Z2021-10-282021-07-27GOMES, Suzane Suliane Vitorino Silva Ferreira. Análise funcional de proteínas de fusão de envelope de Alphabaculovirus e Betabaculovirus em células de inseto. 2021. 84 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2021.https://repositorio.unb.br/handle/10482/42202Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021.Os baculovírus são vírus que infectam insetos de diferentes ordens, incluindo insetos- praga de cultivares economicamente relevantes para o Brasil. Eles são amplamente utilizados como agentes de controle biológico ao redor do mundo e seu uso é caracterizado pela especificidade ao hospedeiro, não acarretando danos a outras espécies e ao meio ambiente. A eficiência da infecção pelos baculovírus nas células de inseto se dá, em grande parte, pela atuação de proteínas de fusão de envelope (EFP, do inglês, Envelope Fusion Protein) que possibilitam o acesso e espalhamento do vírus por diferentes tecidos do animal. Estas proteínas se encontram no fenótipo viral chamado vírus brotado (BV, do inglês, Budded Virus), responsável pela infecção sistêmica. São reportados dois tipos diferentes de EFPs em baculovírus: a proteína GP64 e a proteína F. Estudos prévios com diferentes EFPs demonstraram que a GP64 foi uma aquisição recente na história evolutiva dos baculovírus, enquanto que a proteína F seria mais ancestral a desempenhar a função de entrada do vírus nas células. Dada a sua relevância no ciclo infectivo, o objetivo desse estudo foi realizar uma análise funcional de proteínas de fusão de envelope de dois baculovírus distintos: a GP64 do Condylorrhiza vestigialis nucleopolyhedrovirus (CoveNPV) – um Alphabaculovirus – e a proteína F do Diatraea saccharalis granulovírus (DisaGV) – um Betabaculovirus. Para isso, baculovírus recombinantes foram construídos inserindo o gene destas proteínas no genoma de um baculovírus modelo (Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV) sem o gene da sua EFP endógena (aqui denominado de gp64-null AcMNPV). Ensaios em cultura de células de inseto foram realizados para analisar a capacidade dessas EFPs em recuperar a infectividade viral do gp64-null AcMNPV, bem como análises qualitativas e quantitativas. Os resultados obtidos indicam que a GP64 do CoveNPV é capaz de recuperar a infectividade eficientemente, o que pode ser relacionada à proximidade evolutiva observada para com a GP64 do AcMNPV. Por outro lado, a proteína F do DisaGV não foi capaz de recuperar a infectividade viral, possivelmente por esta proteína pertencer a um vírus com relação filogenética distante do AcMNPV. Além disso, o DisaGV é o único vírus conhecido do gênero Betabaculovirus que possui, além da proteína F, o gene da proteína GP64 funcional. Esses resultados demonstram a intercambialidade que a proteína GP64 possui entre os alphabaculovírus do grupo I e também reforça a distância evolutiva existente para com a proteína F que, por sua vez, possui maior variabilidade de sequência de aminoácidos podendo ser incompatível com a estrutura que um AcMNPV necessita para gerar uma progênie viral.Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Baculoviruses infect insects of many orders, including pests of economically important crops in Brazil. They are widely used as biological control agents worldwide and their use is characterized by host specificity, not infecting other beneficial insect species in the environment. The efficiency of baculovirus infection in insect cells is largely due to the action of envelope fusion proteins (EFP), which enables the access and spread of the virus through different animal tissues. These proteins are in the virus phenotype called budded virus (BV), responsible for systemic infections. Two kind of EFPs are functional in baculoviruses: the GP64 protein and the F protein. Previous studies with different EFPs showed that the GP64 was a recent acquisition in the baculovirus evolutionary history, while the F protein was the more ancestral protein to play the role of virus entry into cells. Given its relevance on the infective cycle, the aim of this study was to perform a functional analysis of envelope fusion proteins from two distinct baculoviruses: the GP64 from Condylorrhiza vestigialis nucleopolyhedrovirus (CoveNPV) – an Alphabaculovirus – and the F protein from Diatraea saccharalis granulovirus (DisaGV) – a Betabaculovirus. For that, recombinant baculoviruses were constructed inserting the genes into a model baculovirus genome (Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus, AcMNPV) without its endogenous EFP (here called gp64-null AcMNPV). Assays in insect cell cultures were performed to analyze the EFPs ability in rescuing the viral infectivity of the gp64-null AcMNPV, as well as qualitative and quantitative analyzes. The results indicate that CoveNPV GP64 is able to rescue the infectivity efficiently, which may be related to the evolutionary proximity observed for the GP64 of AcMNPV. On the other hand, the F protein from DisaGV was not able to rescue the viral infectivity, possibly for this protein belongs to a virus with a distant phylogenetic relationship to AcMNPV. Furthermore, the DisaGV is unique in the Betabaculovirus genus because it has, besides the F protein, a functional GP64 protein gene. These results demonstrate the interchangeability that GP64 protein has between alphabaculoviruses from group I and also reinforces the existing evolutionary distance to the F protein which, in turn, has more amino acid sequence variability and may be incompatible with the structure that an AcMNPV needs to generate virus progeny.A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessAnálise funcional de proteínas de fusão de envelope de Alphabaculovirus e Betabaculovirus em células de insetoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisBaculovírusEFPGP64Proteína FDisaGVCoveNPVporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain671http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/42202/2/license.txtbacfee268cc5d4f6aaa2e6e0066d38f5MD52open accessORIGINAL2021_SuzaneSulianeVitorinoSilvaFerreiraGomes.pdf2021_SuzaneSulianeVitorinoSilvaFerreiraGomes.pdfapplication/pdf4317209http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/42202/1/2021_SuzaneSulianeVitorinoSilvaFerreiraGomes.pdf716f38194d0ae070f174df78115b75ccMD51open access10482/422022023-07-13 15:07:38.868open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2023-07-13T18:07:38Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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