Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pivetta, Luciane Benedita Duarte
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271
Resumo: Orientador: Marcelo Brocchi
id UNICAMP-30_8c06ed4182d019cddad5c7bf9f524ef9
oai_identifier_str oai::794278
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetorDevelopment and characterization of live attenuated Salmonella enterica : evaluation of the immunogenicity and the protective potentialSalmonella entericaVacinasAtenuaçãoSalmonella entericaVaccineAttenuationOrientador: Marcelo BrocchiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Sorovariedades patogênicas de Salmonella enterica constituem um problema de saúde global, que abrange desde gastroenterites até doenças sistêmicas, sendo que ambas podem ser letais. Linhagens atenuadas de S. enterica são promissoras como vacinas vivas, pois são facilmente administradas via oral e capazes de induzir o sistema imune sistêmico e de mucosas do hospedeiro. Além disso, apresentam o potencial de atuar como vacinas multifatoriais, expressando antígenos de outros agentes infecciosos. Neste trabalho, linhagens recombinantes de Salmonella enterica foram construídas e a atenuação da virulência e a estimulação do sistema imune foram avaliadas no modelo murino da salmonelose. As linhagens recombinantes foram desenvolvidas a partir do sistema de recombinação homóloga ?Red, com a deleção de um ou mais genes com efeitos pleiotrópicos na virulência de Salmonella. Após a confirmação da deleção do gene alvo por PCR, as linhagens foram transduzidas com o bacteriófago P22, visando eliminar possíveis problemas com a integridade de lipopolissacarídeos. Posteriormente, caracterizações fenotípicas foram realizadas, por meio de curvas de crescimento in vitro, verificação da capacidade de invasão e sobrevivência no interior de macrófagos e resistência a espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. A atenuação da virulência das linhagens foi avaliada in vivo por meio de inoculações orais e intraperitoneais em camundongos BALB/c/AnUnib e a dose letal média também foi estabelecida. Variados níveis de atenuação foram atingidos e dentre as linhagens desenvolvidas, a duplo mutante para os genes hupA e hupB foi a que apresentou os resultados mais promissores. Nos ensaios de proteção e desafio, 100% dos animais vacinados com duas doses da linhagem 'delta'hupA'delta'hupB sobreviveram ao desafio com doses letais da linhagem selvagem. Para a linhagem duplo mutante também foi verificada a capacidade de colonização bacteriana no sangue, placas de Peyer e baço, assim como a produção de anticorpos IgG e IgA. A obtenção de uma linhagem atenuada, porém capaz de induzir com eficácia o sistema imune do hospedeiro é idealmente almejada no desenvolvimento de uma vacina viva. No entanto, atingir esse balanço é um desafio, já que a deleção de genes de virulência de Salmonella acarreta em diferentes níveis de atenuação, mesmo quando os genes são intimamente relacionados. Uma perspectiva futura é o refinamento das linhagens atenuadas por meio da introdução de antígenos heterólogos e de um sistema de expressão regulado, com o estabelecimento de vacinas multifatoriaisAbstract: Pathogenic Salmonella enterica serovars are the cause of a global health problem that ranges gastroenteritis to lethal systemic disease. Attenuated strains of Salmonella enterica are promising as live vaccines because they are orally administrated and capable of inducing a mucosal and systemic immune response in the host. Besides, they can act as multifactorial vaccines delivering antigens from other diseases. In this work, attenuated strains of Salmonella enterica were produced and the attenuation of the virulence and the induction of an immunologic response were evaluated in the murine model of salmonellosis. The recombinant strains were constructed using the ?Red system of homologous recombination deleting one or more genes with pleiotropic effects on Salmonella virulence. After that, a PCR to confirm the deletion of the target gene was made and the strains were transduced with bacteriophage P22 to avoid problems with lipopolysaccharide's integrity. Phenotypic characterization as the in vitro growth curve of the strains, the resistance to ROI and RNI species and the ability of survival inside J774 macrophages cultures were performed. The attenuation of the strains was evaluated in vivo trough oral and intraperitoneal inoculations of the strains into BALB/c/AnUnib mice and the median lethal dose was also established. Many levels of attenuation were reached and among the developed strains, the double mutant strain for the genes hupA and hupB was the one with the best results. In the protection and challenge assays, 100% of the animal vaccinated with two doses of the 'delta'hupA'delta'hupB strain survived to the challenge with lethal doses of the wild type strain. For this strain it was also verified the capacity of colonization into blood, peyer's patches and spleen as well as the production of IgG and IgA antibodies. In the developmente of a live vaccine it is ideal to have a strain that is attenuated but still capable of inducing an immune response in the host. Reaching this balance is a challenge and the deletion of virulence genes in Salmonella entails different levels of attenuation although they are closely related. A future prospect is the improvement of these attenuated strains with the insertion of controlled expression systems and heterologous antigens, creating a multifactorial vaccineMestradoBioquímicaMestre em Biologia Funcional e Molecular[s.n.]Brocchi, Marcelo, 1967-Pereira, Gonçalo Amarante GuimarãesAlmeida, Maria Elisabete Sbrogio deUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Funcional e MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASPivetta, Luciane Benedita Duarte2011info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf102 p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271PIVETTA, Luciane Benedita Duarte. Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica: avaliação do potencial imunogênico e protetor. 2011. 102 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271. Acesso em: 8 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/794278porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T06:15:20Zoai::794278Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T06:15:20Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
Development and characterization of live attenuated Salmonella enterica : evaluation of the immunogenicity and the protective potential
title Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
spellingShingle Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
Pivetta, Luciane Benedita Duarte
Salmonella enterica
Vacinas
Atenuação
Salmonella enterica
Vaccine
Attenuation
title_short Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
title_full Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
title_fullStr Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
title_full_unstemmed Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
title_sort Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica : avaliação do potencial imunogênico e protetor
author Pivetta, Luciane Benedita Duarte
author_facet Pivetta, Luciane Benedita Duarte
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Brocchi, Marcelo, 1967-
Pereira, Gonçalo Amarante Guimarães
Almeida, Maria Elisabete Sbrogio de
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia
Programa de Pós-Graduação em Biologia Funcional e Molecular
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Pivetta, Luciane Benedita Duarte
dc.subject.por.fl_str_mv Salmonella enterica
Vacinas
Atenuação
Salmonella enterica
Vaccine
Attenuation
topic Salmonella enterica
Vacinas
Atenuação
Salmonella enterica
Vaccine
Attenuation
description Orientador: Marcelo Brocchi
publishDate 2011
dc.date.none.fl_str_mv 2011
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271
PIVETTA, Luciane Benedita Duarte. Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica: avaliação do potencial imunogênico e protetor. 2011. 102 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271. Acesso em: 8 mai. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271
identifier_str_mv PIVETTA, Luciane Benedita Duarte. Construção e caracterização de linhagens atenuadas de Salmonella enterica: avaliação do potencial imunogênico e protetor. 2011. 102 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615271. Acesso em: 8 mai. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/794278
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
102 p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1798511716043063296

Registros relacionados