Comparação de métodos moleculares para detecção de Bartonella spp. em doadores de sangue do Hemocentro de Campinas/SP

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Drummond, Marina Rovani, 1985-
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633787
Resumo: Orientadores: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho, Pedro Paulo Vissotto de Paiva Diniz
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spelling Comparação de métodos moleculares para detecção de Bartonella spp. em doadores de sangue do Hemocentro de Campinas/SPComparison of molecular methods for detection of Bartonella spp. in blood donors at the Blood Bank of Campinas/SPBartonellaDoadores de sangueReação em cadeia da polimeraseDiagnósticoBartonellaBlood donorsPolymerase chain reactionDiagnosisOrientadores: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho, Pedro Paulo Vissotto de Paiva DinizTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O gênero Bartonella é constituído por patógenos reemergentes e negligenciados, associados a um amplo espectro de doenças humanas potencialmente fatais. Não existe um teste padrão-ouro para o diagnóstico destes agentes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência de Bartonella spp. em 500 doadores de sangue do Hemocentro de Campinas/SP. Foram utilizados métodos moleculares (PCR convencional, PCR nested e PCR em tempo real) para o diagnóstico da infecção assintomática por Bartonella spp.. Foi extraído DNA de amostras de sangue e das culturas líquidas que foram analisadas por: (A) PCR convencional para duas regiões gênicas, (A1) a ITS que tem como alvo o gênero Bartonella e (A2) a gltA específica para Bartonella henselae; (B) PCR de dupla amplificação (nested) para a região ftsZ e (C) PCR em tempo real para a região gltA, ambas espécie-específicas para B. henselae. Considerando as quatro reações realizadas obtiveram-se 30/500 (6%) positivos do DNA extraído do sangue; 77/500 (15,4%) positivos do DNA extraído de cultura líquida sendo que cinco amostras foram positivas para ambas as amostras. No total, 102/500 (20,4%) doadores foram positivos. A análise estatística revelou que para este grupo: (1) a PCR convencional para a região gltA é a menos sensível; (2) a PCR em tempo real (gltA) é o melhor teste para cultura líquida; (3) para amostras de sangue não há diferença na sensibilidade entre a PCR nested e a PCR em tempo real (gltA). As amostras utilizadas neste estudo já haviam sido submetidas à pesquisa para este mesmo agente utilizando apenas PCR convencional na cultura líquida. Dezesseis (3,2%) amostras foram positivas anteriormente, e, destas, 13 foram negativas na nova investigação. Conclui-se que o uso de cultura líquida combinado a diferentes testes moleculares aumentam a possibilidade de detectar a infecção assintomática por estas bactérias, mas não evitam resultados falso-negativos. Considerando-se também os resultados obtidos anteriormente, o DNA de Bartonella spp. foi identificado ou o agente isolado em 23% dos doadores analisados. Constatou-se alta prevalência de Bartonella spp. no sangue de doadores. Os resultados apresentados estabelecem a necessidade de uma reavaliação pelas autoridades de saúde pública dos riscos e do impacto da transmissão de Bartonella spp. por meio de transfusões sanguíneas, especialmente para os pacientes imunodeficientes. Como também demostrado, a baixa bacteremia e a característica fastidiosa da bactéria são desafios ao diagnóstico laboratorial e podem dificultar a confirmação da infecção em pacientes com bartonelosesAbstract: The Bartonella genus consists of reemerging and neglected pathogens, associated with a broad spectrum of potentially fatal human diseases. There is no gold standard for the diagnosis of these agents. The aim of this work was to evaluate Bartonella spp. prevalence in 500 blood donors from Campinas/ Sao Paulo. We used molecular methods (conventional PCR, nested PCR and real time PCR) in the diagnosis of Bartonella sp. asymptomatic infection. DNA was extracted from blood samples and from liquid cultures. These samples were analyzed by: (A) conventional PCR for two gene regions, (A1) the ITS targeting the genus Bartonella and (A2) the specific gltA Bartonella henselae; (B) nested PCR for the ftsZ region and (C) real-time PCR for the gltA region, both species-specific for B. henselae. Considering the four reactions performed, we got 30/500 (6%) positives from DNA extracted from the blood; 77/500 (15.4%) positives from DNA extracted from liquid culture and five samples were positive for both samples. In total, 102/500 (20.4%) donors were positive. Statistical analysis revealed that: (1) conventional PCR for the gltA region is the less sensitive; (2) real-time PCR (gltA) is the best test for liquid culture; (3) for blood samples there is no difference in sensitivity between nested PCR and real-time PCR (gltA). The samples used in this study had already been submitted for Bartonella spp. diagnosis using only conventional PCR in the liquid culture. Sixteen samples (3.2%) were positives previously and, from these samples, 13 were negative in the new investigation. We concluded that the use of liquid culture combined with different molecular tests increases the possibility of detecting asymptomatic infection by these bacteria, but the tests do not avoid false-negative results. Considering also the results obtained previously, the DNA of Bartonella spp. was identified or the agent isolated in 23% of analyzed blood donors. This study revealed a high prevalence of Bartonella spp. in the blood of donors. The presented results establish the need for an evaluation by the public health authorities of the risks and impact of the transmission of Bartonella spp. by blood transfusions, especially for immunodeficient patients. As demonstrated by these results, the low bacteremia and the fastidious characteristic of the bacterium are challenges to the laboratory diagnosis and can make difficult the confirmation of the infection in patients with bartonellosesDoutoradoClínica MédicaDoutora em CiênciasFAPESP2013/14211-3CNPQ159717/2013-2[s.n.]Velho, Paulo Eduardo Neves Ferreira, 1966-Diniz, Pedro Paulo Vissotto de PaivaConterno, Lucieni de OliveiraAndré, Marcos RogérioBranchini, Maria Luiza MorettiBrocchi, MarceloUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Clínica MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASDrummond, Marina Rovani, 1985-20182018-01-17T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (84 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1633787DRUMMOND, Marina Rovani. 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