Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Costa, Ana Paula Dalla
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439
Resumo: Orientador: Kleber Gomes Franchini
id UNICAMP-30_daf30f147c958224601a3e500a32d1ed
oai_identifier_str oai::443428
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastosMechanisms of control metalloproteinases 2 and 9 expression and activity by focal adhesion kinase un mouse cardiac fibroblastsProteína-tirosina quinases de adesão focalMetaloproteinase 2 da matrizMetaloproteinase 9 da matrizFibroblastosFocal adhesion kinaseMatrix metalloproteinase 2Matrix metalloproteinase 9FibroblastsOrientador: Kleber Gomes FranchiniDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Mudancas dinamicas que ocorrem no intersticio do coracao contribuem diretamente para o remodelamento miocardico decorrente de doencas cardiacas tais como infarto do miocardio, cardiopatia hipertensiva e cardiomiopatias. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) sao importantes no remodelamento destas doencas. Estimulos mecanicos e neuro-humoral regulam a expressao e atividade de MMPs atraves de multiplos processos. Em estudos previos verificamos que o silenciamento da FAK no VE de camundongos inibe a fibrose e reduz a atividade de MMP2. Objetivamos avaliar o papel da FAK no controle da ativacao de fibroblastos cardiacos de ratos(FCRNs), induzidos por estiramento mecanico. Os FCRNs foram cultivados em placas Bioflex e submetidos a estiramento ciclico (10%) por ate 8 horas, exceto os controles. A expressao e atividade da FAK foram avaliadas por imunoblottings com anticorpos especificos para FAK ou pFAK Tyr397, respectivamente. A expressao das MMPs 2 e 9 foi avaliada em imunoblottings e a atividade por zimografia ambas no sobrenadante da cultura. O estiramento provocou aumento de 2.4 vezes da quantidade de FAK fosforilada em Tyr397, alem da expressao e a atividade de MMP 2 e 9. Alem disto, modificou os parametros de proliferacao dos FCRNs, mostrando aumento de celulas positivas para Ki67 e BrdU. Do mesmo modo, a diferenciacao em miofibroblastos foi ativada(celulas positivas para a-actina de musculo liso (a-SMA). A inibicao genica da FAK atraves da tecnica de interferencia de RNA (siRNAFAK), nos FCRNs, inibiu a expressao de a-SMA, a atividade e a expressao das MMPs 2 e 9. Alem disso, a deplecao da FAK em FCRNs promoveu a diminuicao da fosforilacao em AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, e S6 quinase Thr389 em resposta ao estiramento mecanico. A ativacao dos FCRNs foi impedida pelo pre-tratamento com o inibidor do complexo mTOR, rapamicina. Assim mostramos que a FAK medeia a ativacao de FCRNs invocado pelo estresse mecanico, possivelmente atraves da coordenacao da via de sinalizacao mTOR. Os resultados do presente estudo indicam a ativacao da FAK pode ter um papel critico na proliferacao e diferenciacao, e na ativacao de MMPs em FCRNs quando submetidos a estiramento, e ainda o knockdown da FAK apresenta efeitos contrarios, logo, infere-se o papel da FAK na ativacao de fibroblastos cardiacos.Abstract: Dynamic changes that occur in the heart interstitium contribute directly to the myocardial remodeling due to heart disease such as myocardial infarction, hypertensive heart disease and cardiomyopathies. The extracellular matrixmetalloproteinases (MMPs) play an important role in remodeling in these diseases. Mechanical and neuro-humoral stimuli regulate the MMPs expression/activity through several processes which include the control of expression, activation by cascades of own MMPs and endogenous inhibitors. In recent studies from our laboratory showed that the FAK silencing in the left ventricle of mice inhibits the fibrosis development, and in parallel reduced the MMP2.activity and expression. The purpose of this study was to evaluate the role of FAK in controlling the MMP 2 and 9 expression and activity in rat cardiac fibroblasts. Cardiac fibroblasts from neonatal rat (FCRNs) were grown on silicon plates and then subjected to cyclic stretch (10%) for up to 8 hours, except the controls. The FAK expression and activity were assessed for imunoblottings through with specific antibodies to FAK or phospho -FAK Tyr397, respectively. The expression of MMP 2 and 9 was evaluated with specific antibodies in imunoblottings and activity through zimography both in the supernatant culture. Furthermore, FCRNs depleted of FAK was defective in AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, and S6 kinase Thr389 phosphorylation in response to cyclic stretch. The activation of CF-P3/80 invoked by cyclic stretch was prevented by pre-treatment with the mTOR complex inhibitor rapamycin. These findings demonstrate that FAK signaling plays a critical role in mediating the activation of cardiac fibroblasts invoked by mechanical stress possibly by coordinating the downstream mTOR signaling pathway. The results of this study indicate that the activation of FAK can have a critical role to MMPs activation in cardiac fibroblasts, as well as, the proliferation and differentiation of these cells when subjected to stretching, and the FAK knockdown presents contrary effects, therefore, to corroborate infer the FAK role in differentiation and proliferation cell, and the MMPs balance in cardiac fibroblasts.MestradoBiologia Estrutural, Celular e do DesenvolvimentoMestre em Fisiopatologia Médica[s.n.]Franchini, Kleber Gomes, 1961-Silva, Valdo Jose Dias daCarvalho, Hernandes Faustino deUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCosta, Ana Paula Dalla20092009-05-03T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf141 p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439COSTA, Ana Paula Dalla. Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos. 2009. 141 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/443428porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T05:31:54Zoai::443428Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T05:31:54Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
Mechanisms of control metalloproteinases 2 and 9 expression and activity by focal adhesion kinase un mouse cardiac fibroblasts
title Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
spellingShingle Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
Costa, Ana Paula Dalla
Proteína-tirosina quinases de adesão focal
Metaloproteinase 2 da matriz
Metaloproteinase 9 da matriz
Fibroblastos
Focal adhesion kinase
Matrix metalloproteinase 2
Matrix metalloproteinase 9
Fibroblasts
title_short Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
title_full Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
title_fullStr Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
title_full_unstemmed Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
title_sort Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos
author Costa, Ana Paula Dalla
author_facet Costa, Ana Paula Dalla
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Franchini, Kleber Gomes, 1961-
Silva, Valdo Jose Dias da
Carvalho, Hernandes Faustino de
Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas
Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Médica
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Costa, Ana Paula Dalla
dc.subject.por.fl_str_mv Proteína-tirosina quinases de adesão focal
Metaloproteinase 2 da matriz
Metaloproteinase 9 da matriz
Fibroblastos
Focal adhesion kinase
Matrix metalloproteinase 2
Matrix metalloproteinase 9
Fibroblasts
topic Proteína-tirosina quinases de adesão focal
Metaloproteinase 2 da matriz
Metaloproteinase 9 da matriz
Fibroblastos
Focal adhesion kinase
Matrix metalloproteinase 2
Matrix metalloproteinase 9
Fibroblasts
description Orientador: Kleber Gomes Franchini
publishDate 2009
dc.date.none.fl_str_mv 2009
2009-05-03T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439
COSTA, Ana Paula Dalla. Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos. 2009. 141 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439. Acesso em: 15 mai. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439
identifier_str_mv COSTA, Ana Paula Dalla. Mecanismos de controle da expressão e atividade de metaloproteinases 2 e 9 pela quinase de adesão focal em fibroblastos. 2009. 141 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1609439. Acesso em: 15 mai. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/443428
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
141 p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1799138453957378048

Registros relacionados