Caracterização bioquímica e purificação das endoglucanases produzidas por Myceliophthora thermophila M.7.7 em cultivo em estado sólido

• Main Author: Massarente, Vanessa Salto
• Publication Date: 2018
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNESP
• Download full: http://hdl.handle.net/11449/154468
• topic: Enzimas; Endoglucanases; Fungos termofílicos; Bioenergia; Enzymes; Endoglucanases; Thermophilic fungi; Bioenergy

As celulases são enzimas empregadas principalmente na indústria de papel e celulose e têxtil, e têm ganhado destaque pelo seu potencial hidrolítico em materiais lignocelulósicos na produção de etanol, já que são capazes de hidrolisar a celulose. O objetivo do projeto foi efetuar a caracterização e isolamento das endoglucanases produzidas pelo fungo termofílico Myceliophthora thermophila M.7.7 em cultivo em estado sólido. Foram realizados ensaios para avaliar os efeitos do pH, da temperatura, de diversas substâncias químicas, cátions e compostos fenólicos na atividade enzimática. A estimativa da massa molecular foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), e como resultado foi possível observar sete endoglucanases detectadas por zimografia, que possuem massa molecular estimada entre 26 e 82 kDa. O valor ótimo para o pH do extrato enzimático bruto foi 5,5 e 70ºC para a temperatura ótima em incubação de 4 minutos. Em relação à estabilidade do extrato bruto, os maiores valores ocorreram entre as faixas de pH de 6 a 6,5, e 30 e 40ºC para temperatura até 120 minutos. Entre os reagentes testados, Triton, DTT e Isopropanol aumentaram a atividade enzimática sobre o extrato bruto em cerca de 10%. Os cátions NaCl, SrCl2, BaCl2 e ZnCl2 aumentaram a atividade das endoglucanases. Em relação aos compostos fenólicos, todos induziram em diversos graus o decréscimo da atividade das endoglucanases do extrato bruto. Das sete endoglucanases, três foram isoladas pela extração direta do gel após eletroforese em poliacrilamida. Duas possuem atividade considerável entre os pHs 4,0 e 7,0, e uma em pH 10,5. As três enzimas apresentaram redução em sua atividade nos pHs 8,5 e 9,0, porém apresentaram boa atividade nos pHs 10,0 e 10,5 e tiveram sua temperatura ótima em 70ºC. Avaliaram-se os parâmetros termodinâmicos das endoglucanases do extrato enzimático bruto, permitindo determinar o tempo de meia vida em 165 minutos a 50ºC, e elevada resistência estrutural à desnaturação térmica, analisados pela variação da entropia, energia livre de Gibbs e entalpia.