Caracterização do meio de cultura de células tronco mesenquimais adiposas de cães

• Autor(a) principal: Silvestre, Priscila Modesto
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/193100
• topic: Secretoma celular; Células tronco adiposas; Proteômica; Cellular secretoma; Adipose stem cells; Proteomics

Introdução: O secretoma é definido como proteínas liberadas por uma célula, tecido ou organismo por meio de mecanismos de secreções clássicas e não clássicas. Até o momento, as proteínas secretadas com caracterização melhor, são proteínas liberadas pelas células tronco mesenquimais (CTMs), adiposas (CTMAs), neurais e embrionárias entre outras. As CTMAs podem ser facilmente isoladas em grandes quantidades a partir de tecido adiposo obtido por procedimentos cirúrgicos simples. Estas células expressam uma série de proteínas específicas e marcadores fenotipicamente semelhantes às CTMs. Assim como as CTMs, têm o potencial de se diferenciar em linhagens osteogênicas, condrogênicas, miogênicas, neuronais, cardiomiócitas, epiteliais e endoteliais. Avanços recentes no perfil molecular permitiram mapeamento de proteínas secretadas por vários tipos de células. As técnicas oferecem uma ligeira vantagem na detecção de proteínas menos abundantes em meios condicionados. Métodos baseados nas medições de intensidades de pico espectrais de massa foram introduzidos recentemente em conjunto com melhorias na tecnologia de espectrometria de massa e fornecem uma maneira conveniente e confiável em estudos proteômicos. Objetivo: O objetivo foi analisar o meio condicionado de CTMAs de cães, por meio da análise proteômica para identificar alvos expressos na solução e avaliar as suas funções. Métodos: As CTMAs foram isoladas a partir de tecido adiposo de cães, diferenciadas e caracterizadas por citometria de fluxo em terceira passagem com os marcadores CD34, CD45, CD90 e CD71. As análises labell free de espectrometria de massas foram realizadas por meio de um equipamento de nanocromatografia líquida Ultimate 3000 LC acoplado à um equipamento de espectrometria de massas Q-Exactive. A identificação das proteínas foram submetidas ao software PatternLab (versão 4.0.0.84). A análise da expressão no secretoma destas células permitiu avaliar relações com proliferação e interação celular, sinalizações, além de modulação do sistema imune e angiogênese. Este conhecimento possibilitará aplicações do secretoma e não mais das células tronco, minimizando assim possíveis riscos de imunogenicidade, questões éticas e regulatórias.