Isolamento e criopreservação de espermatogônia tronco de Pseudopimelodus mangurus e análises preliminares de ciclosporina A como imunossupressor em receptores de células germinativas

• Autor(a) principal: Pessoa, Giselle Pessanha
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/242651
• topic: Conservação; Busulfan; Manipulação cromossômica; Quimera germinativa; Esterilização química; Ciclosporina A

A região Neotropical abriga a maior diversidade de peixes continentais do mundo, grande parte descrita em território brasileiro. Aproximadamente 10% dessa ictiofauna está ameaçada de extinção, principalmente devido a ações antrópicas. Diversas áreas do conhecimento têm voltado a atenção para a conservação da biodiversidade aquática, como o transplante interespecífico de células germinativas. Esta técnica permite que uma espécie de peixe produza gametas de outra espécie, podendo atuar na conservação de peixes ameaçados de extinção. Pseudopimelodus mangurus (Siluriformes) foi utilizado para estudo como doador de espermatogônias-tronco e Astyanax altiparanae (Characiformes) como receptor. As espermatogônias-tronco de P. mangurus foram obtidas pela associação das técnicas de dissociação enzimática, gradiente de densidade de Percoll e plaqueamento diferencial. A pureza de espermatogônias-tronco após o plaqueamento diferencial foi de 60,14% ± 2,93%, sendo 6% maior que no gradiente de densidade de Percoll. A análise da expressão relativa de ddx4 e da atividade da fosfatase alcalina em espermatogônias-tronco evidenciaram suas características de células tronco. As espermatogônias-tronco foram criopreservadas utilizando cinco 5 crioprotetores, em três molaridades distintas. O propanediol a 1 M melhor preservou a integridade e viabilidade celular. Os receptores de A. altiparanae foram produzidos pela combinação das técnicas de manipulação cromossômica e esterilização química com busulfan, sendo obtida a depleção da espermatogênese. Leucócitos de A. altiparanae foram cultivados in vitro nas concentrações 0,1, 0,15 e 0,2 µg/µL de ciclosporina A (CsA). A viabilidade e concentração dos leucócitos diminuíram nas 24 e 48 h do cultivo, sendo que a menor concentração de CsA resultou na maior viabilidade leucocitária. Na avaliação da CsA in vivo foram utilizados juvenis triploides de A. altiparanae separados nos seguintes grupos, (i) não esterilizados com busulfan, (ii) esterilizados com busulfan, (iii) esterilizados e injetados com emulsão, (iv) esterilizados e injetados com 20 mg/kg de CsA e (v) esterilizados e injetados com 40 mg/kg de CsA. As amostras foram submetidas às análises histológicas do rim cranial e gônada, de expressão da interleucina-1β (IL-1β) em rim cranial e contagem de leucócitos por esfregaço sanguíneo, anterior a aplicação de CsA e aos 5 e 10 dias após. Não houve diferença quanto aos aspectos histológicos de rim cranial ou das gônadas entre os grupos. A expressão de IL-1β foi diminuída nos rins dos animais administrados com CsA em ambas concentrações. A administração de CsA diminuiu o número de células brancas no sangue e conduziu a anemia nos animais. O uso de imunossupressor pode melhorar a eficiência do transplante interespecífico de espermatogônias em ações de conservação.