Utilização da LAMP para diagnóstico e avaliação da eficácia terapêutica do cloridrato de isometamidium em bovinos naturalmente infectados com Trypanosoma vivax

• Autor(a) principal: Castilho Neto, Kayo José Garcia de Almeida
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/157326
• topic: ELISA; Métodos moleculares; Tratamento; Tripanossomíases

Tripanossomíases são doenças causadas por agentes do gênero Trypanosoma, que infectam humanos, animais domésticos e silvestres nos continentes Africano, Asiático, Américas do Sul e Central. Os sinais clínicos da enfermidade, como anemia e emagrecimento, são genéricos e também devido à presença de intervalos aparasitêmicos, o diagnóstico da doença torna-se desafiador. Quimioterápicos como aceturato de diminazeno (AD) e cloridrato de isometamidium (ISM) estão disponíveis para o tratamento da doença no Brasil, muito embora existam relatos e indícios de resistência aos princípios. Este trabalho teve como objetivo utilizar a amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) no diagnóstico e avaliar a cura parasitológica de bovinos naturalmente infectados por Trypanosoma vivax após o tratamento com ISM. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, que foram tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/Kg por via intramuscular profunda nos dias 0 e 150. Amostras de sangue e soro colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após o tratamento, foram submetidas ao diagnóstico de T. vivax pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR) objetivando o gene alvo CatL-Like, LAMP visando o gene alvo DNA satélite e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA) com antígeno bruto solúvel de T. vivax. Também, foi realizada uma PCR adicional para diagnóstico de infecção por T. theileri direcionado ao gene CATL. Houve persistência na detecção de DNA de T. vivax na PCR e LAMP bem como detecção contínua de anticorpos anti-T. vivax pelo método de ELISA após o tratamento instituído, sugerindo a presença de resistência do parasita ao ISM. Todas as amostras testadas para o diagnóstico de T. theileri pela PCR foram negativas. A LAMP se mostrou de grande utilidade no diagnóstico de animais naturalmente infectados, porém a combinação dos testes LAMP e ELISA podem evitar falsos diagnósticos, contribuindo para um melhor controle da doença. Os dados indicam que a PCR não é indicada para diagnóstico de T. vivax em animais apresentando baixa parasitemia, sendo, portanto não recomendada para promover o acompanhamento de animais após o tratamento com drogas tripanocidas.