Detecção de Tobacco streak virus em Nicotiana tabacum e tripes vetores por meio de RT-PCR em tempo real e respostas quimiotáxicas de Orius insidiosus ao complexo N. tabacum, Myzus persicae e fitormônios

• Autor(a) principal: Ozório, Dania Vieira Branco
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/248944
• topic: Fumo; Tripes; Necrose branca; Doença de planta; Praga de planta; Controle biológico

A cultura do tabaco, Nicotiana tabacum L. (Solanaceae), tem grande importância para a região Sul do Brasil, pelo elevado valor comercial do produto e pela capacidade de geração de empregos, desde o cultivo até a industrialização. O Tobacco streak virus (TSV), gênero Ilarvirus, agente causal da necrose branca do fumo tem sido registrado no Paraná provocando perdas de produtividade e qualidade nas lavouras de fumo. Os métodos convencionais de detecção apresentam falhas na identificação do TSV por terem baixa sensibilidade e especificidade. Além disso, os modelos de RT-PCR convencionais requerem a purificação do ácido nucleico, o que é laborioso e aumenta o risco de contaminação. Orius insidiosus (Say) (Hemiptera, Anthocoridae) é um predador mundialmente usado como agente de controle biológico de tripes e pulgões, vetores responsáveis pela ocorrência de diversas viroses do fumo. Assim, este trabalho teve como objetivos: a) desenvolver e validar um protocolo de preparação de amostras direto e de RT-PCR em tempo real com uso de sonda TaqMan para detecção do TSV em plantas de tabaco e tripes e b) avaliar as respostas quimiotáxicas de fêmeas de O. insidiosus frente a N. tabacum infestada ou não com Myzus persicae (Sulzer) (Hemiptera, Aphididae); ao pulgão e a plantas de tabaco aspergidas com ácido salicílico e metil jasmonato. Foi comparado o protocolo de purificação de RNA baseado em kit comercial (Promega), com o método de diluição do extrato vegetal para uso direto na RT-PCR em tempo real, com a sonda TaqMan desenvolvida. A RT-PCR em tempo real amplificou tanto a partir de amostras de RNA purificado como de extrato vegetal diluído, e através das diluições se mostrou mais sensível que a RT-PCR em tempo real com o uso de SYBR-Green e ELISA. O protocolo de preparação de amostras e de amplificação por RT-PCR em tempo real com sonda TaqMan, permitiu a detecção do TSV em material vegetal e em tripes, de maneira sensível, específica e precisa. Em relação às respostas quimiotáxicas, fêmeas de O. insidiosus foram atraídas apenas às plantas infestadas com pulgões (p < 0,001). Nenhuma das doses de fitormônios gerou resposta das fêmeas, pois podem não ter alterado o perfil químico das plantas.