Detecção e contagem de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae no leite por PCR em tempo real

• Autor(a) principal: Aline Gerato Dibbern
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Texto Completo: https://doi.org/10.11606/D.10.2016.tde-04082015-111522

O presente trabalho foi organizado em dois estudos. O objetivo do primeiro estudo foi determinar o efeito da infecção intramamária (IIM) causada por S. aureus e S. agalactiae na contagem de células somáticas (CCS) e na composição do leite (gordura, proteína, lactose, sólidos totais e extrato seco desengordurado), o efeito da contagem de S. aureus e S. agalactiae sobre a composição do leite e a estimativa da frequência de vacas e de quartos infectados com S. aureus e S. agalactiae por meio da contagem do tanque. O objetivo do segundo estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase em Tempo Real (qPCR) como metodologia alternativa à cultura microbiológica, por meio da sensibilidade diagnóstica, da concordância e da equivalência entre as metodologias para identificação e contagem de S. aureus e S. agalactiae de origem das vacas com IIM. O experimento foi realizado em quatro rebanhos comerciais com histórico de mastite causada por S. aureus e S. agalactiae. Foram coletadas 785 amostras compostas de leite, 3049 amostras de leite de quartos mamários de todas as vacas em lactação e 12 amostras de leite de tanque dos rebanhos selecionados, durante 3 meses consecutivos, totalizando 3 coletas por rebanho. As amostras de leite foram submetidas à detecção e contagem de S. aureus e S. agalactiae por meio de cultura microbiológica e de qPCR, e à análise de composição e CCS. No primeiro estudo, foi observado que amostras compostas de leite com S. agalactiae apresentaram menores teores de lactose e maiores teores de gordura, proteína, sólidos totais e CCS, e com S. aureus apresentaram menores teores de lactose e maiores teores de proteína e de CCS do leite. O aumento da contagem de S. aureus e S. agalactiae em amostras compostas de leite pode ocasionar aumento linear nos teores de lactose e de extrato seco desengordurado. Foi observado que as amostras compostas de leite e de quartos mamários apresentaram relação positiva referente às contagens de S. aureus e S. agalactiae e ao percentual (%) de amostras de leite com S. aureus e S. agalactiae. A partir de amostras compostas de leite pode-se estimar o percentual de quartos mamários com S. aureus e S. agalactiae. A contagem de S. aureus e de S. agalactiae de amostras de leite de tanque pode estimar o percentual de vacas com S. aureus e o percentual de quartos mamários com S. agalactiae. No segundo estudo, foi observado equivalência e concordância de resultados de identificação e contagem de S. agalactiae entre as metodologias de qPCR e cultura microbiológica somente em amostras de leite de tanque e de quartos mamários. Em amostras de leite com S. aureus e S. agalactiae, a qPCR apresentou sensibilidade diagnóstica de 71,54% e 90.20% em amostras de leite de quartos mamários, 71,79% e 87,72% em amostras compostas de leite e 50,00% e 90,91% em amostras de leite de tanque, respectivamente. Portanto, o leite de tanque e a qPCR podem se utilizadas para monitoramento da mastite bovina no rebanho leiteiro