Renatura????o da prote??na de envelope do v??rus da zika e do dom??nio III da mesma prote??na utilizando altas press??es

• Autor(a) principal: SANTOS, DAVID P. dos
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30804
• topic: zika virus; molecular biology; elementary particles; proteins; bacterial spores; cell cultures; pressure range mega pa 10-100; immunotherapy; micellar systems; biotechnology

Grande parte das prote??nas de import??ncia biom??dica s??o encontradas em concentra????es pequenas nas suas formas nativas. Uma alternativa para obten????o de prote??nas em grande escala ?? s??ntese por bact??rias Escherichia coli geneticamente modificadas. Entretanto, frequentemente essas prote??nas s??o produzidas como agregados insol??veis e inativos, denominados de corpos de inclus??o (CI). Para se tornarem bioativas as prote??nas nos CI devem ser renaturadas. O nosso objetivo foi o estabelecimento de um processo r??pido e eficiente de obten????o da prote??na de envelope (E) e do dom??nio III desta mesma prote??na (EDIII) do v??rus da ZIKA (ZIKV) sol??veis e com atividade imunol??gica a partir de CI. A utiliza????o destas prote??nas se justifica pela sua relev??ncia para o desenvolvimento de ensaios diagn??sticos e para a produ????o de vacinas de ZIKV. A associa????o de alta press??o e pH alcalino se mostrou eficiente para a solubiliza????o dos CI. A incuba????o dos CI em alta press??o (2,4 kbar por 90 min e 0,4 kbar por 14,5 h) em pH de 10,5 foi a melhor condi????o encontrada na qual foi obtida solubiliza????o eficiente dos CI com baixa desnatura????o proteica. O enovelamento das prote??nas presentes nos sobrenadantes das suspens??es submetidas ?? alta press??o foi obtido por di??lise em tamp??o em pH de 8,5. A recupera????o do E sol??vel nesta condi????o foi de mais de 90% e a de EDIII foi de 80% em rela????o ??s quantidades totais dessas prote??nas nos CI e os rendimentos foram de 130 mg de E e de 35 mg de EDIII/L de cultura bacteriana. As prote??nas E e EDIII permaneceram imunologicamente ativas e foram recuperadas principalmente como mon??meros e d??meros. O procedimento proposto representa uma alternativa para a produ????o de prote??nas recombinantes imunologicamente ativas expressas como CI.