Renatura????o das prote??nas n??o estruturais 1(NS1) dos v??rus da zika e da dengue utilizando altas press??es

• Autor(a) principal: SILVA, CLEIDE M.R. da
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/28473
• topic: microorganisms; bacteria; escherichia coli; viral diseases; microstructure; folding model; pore pressure; hydrostatics; stability; antibody formation; alkaline hydrolysis; fluorescence spectroscopy; enzyme immunoassay

As principais mat??rias primas necess??rias para a prepara????o de testes diagn??sticos s??o as prote??nas dos pat??genos que necessariamente apresentem as estruturas nativas. O objetivo do presente estudo foi a obten????o das prote??nas n??o estruturais 1 (NS1) dos v??rus da dengue (DENV) e da zika (ZIKV) a partir dos corp??sculos de inclus??o (CI) produzidos em bact??rias Escherichia coli. Mostramos que a combina????o de alta press??o hidrost??tica (APH) e pH alcalino ?? eficiente para a solubiliza????o de NS1-CI. A incuba????o em 2,4 kbar das suspens??es de NS1-CI em pH alcalino mostrou-se eficiente para a solubiliza????o da NS1. A presen??a de Arg promove a dissocia????o de olig??meros. A aplica????o de 2,4 kbar ??s suspens??es de NS1-CI em pH de 10,5 (DENV) e de 11,5 (ZIKV) na presen??a de Arg e um par redox, seguida de di??lise em tamp??o em pH 8,5, foram as condi????es escolhidas para o reenovelamento de NS1. Obtivemos ambas NS1 com rendimentos entre 75% e 90% em rela????o ??s quantidades totais das prote??nas presente nos correspondentes CI de NS1. As NS1 reenoveladas apresentaram reatividade compar??vel ??s prote??nas obtidas utilizando um protocolo convencional estabelecido, com rendimentos mais de 25 vezes superiores. Foi obtido um processo altamente eficiente para o reenovelamento de NS1 apresentando caracter??sticas biol??gicas preservadas em rela????o a reatividade com anticorpos espec??ficos de ant??geno, incluindo soro de paciente infectado com zikv e que, portanto, podem ser usados como ant??geno para o desenvolvimento de vacinas ou testes de diagn??stico. Al??m disso, este estudo descreve a cria????o de um processo inovador, que ?? a utiliza????o concomitante de APH e pH alcalino, para solubiliza????o e posterior reenovelamento de NS1-CI que podem ser utilizados para outras prote??nas relevantes.