Análise proteômica das proteínas solubilizadas da membrana do Trypanossoma evansi/Franciane Batista

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Batista, Franciane
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESC
Texto Completo: http://sistemabu.udesc.br/pergamumweb/vinculos/000055/00005582.pdf
Resumo: Orientador: Luiz Claudio Miletti
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spelling Análise proteômica das proteínas solubilizadas da membrana do Trypanossoma evansi/Franciane Batista636.089696DiagnósticoParasitologia veterináriaOrientador: Luiz Claudio MilettiTese (doutorado)-Universidade do Estado de Santa Catarina, Centro de Ciências Agroveterinárias, Doutorado em Ciência Animal, Lages, 2016Bibliografia: p. 99-107Disponível em formato AcrobatO Trypanosoma evansi é o agente etiológico da doença conhecida como mal das cadeiras ou ?Surra?. Trata-se de uma doença de extrema importância, pois a mesma causa grandes prejuízos econômicos na pecuária de alguns países. Diferentes espécies de animais são acometidas por esse agente e o grau de severidade varia de acordo com o hospedeiro. A principal espécie afetada são os equinos os quais apresentam diferentes sinais clínicos de acordo com a evolução da doença. A forma mais grave ocorre quando o parasito atinge o sistema nervoso central provocando dificuldade de locomoção. Esse é o sinal clínico mais característico dessa doença, porém sinais inespecíficos como anemia, imunossupressão, icterícia e queda na produção também podem ser observados. A interação do parasito com o hospedeiro é realizada através do contato entre as células do sistema imune do hospedeiro e as proteínas de superfície do protozoário. Com objetivo de conhecer mais detalhadamente essa interação, proteínas de superfície do T. evansi foram solubilizadas com o uso do Triton X-114 e analisadas. Para istoT. evansi mantidos criopreservados foram utilizados para a infecção experimental de camundongos, sendo a inoculação realizada intra-peritonealmente em triplicatas biológicas. A infecção desses animais foi acompanhada diariamente através de esfregaços sanguíneos corados por panótico e visualizados em microscópio óptico. A purificação do parasito foi realizada com Percoll® seguida de cromatografia em coluna de DEAE-celulose equilibrada com PBS-glicose. Após este procedimento os T. evansi foram armazenados no freezer -80°C para posterior extração das proteínas. As proteínas de superfície foram extraídas de acordo com protocolo estabelecido anteriormente. As proteínas foram analisadas por LC-ESI-MS/MS para identificação no Centers for Disease Control and Prevention (CDC) em Atlanta-EUA. O resultado foi interpretado utilizando-seo MASCOT e o banco de dados de sequências gênicas doTrypanosoma evansi e Trypanosoma brucei. Com essas análises foi possível identificar 439 proteínas somente na fração rica em proteínas de membrana. Algumas proteínas de interesse foram selecionadas e analisadas por bioinformática para obtenção de dados sobre a predição de sua localização e possível presença de epitopo. Com o intuito de avaliar o reconhecimento de proteínas específicas através de imunoblot foi desenvolvido anticorpo policlonal contra T.evansi. Esse anticorpo foi produzido em ratos Wistar através de inoculações sucessivas de proteínas totais de T.evansi com adjuvante de Freund completo e incompleto de acordo com o protocolo. O soro foi testado e apresentou uma titulação de 1:2000, reconhecendo proteínas específicas na fração enriquecida com proteínas de membranaExigências do sistema: Adobe Acrobat ReaderMiletti, Luiz Claudio OrientadorUniversidade do Estado de Santa Catarina.Doutorado em Ciência AnimalBatista, Franciane2016info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttp://sistemabu.udesc.br/pergamumweb/vinculos/000055/00005582.pdfporpor engTexto em português com resumo em inglêsDisponível em PDF, versão on-linereponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UDESCinstname:Universidade do Estado de Santa Catarinainstacron:UDESCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2019-07-20T19:34:43Zmail@mail.com -
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Disponível em formato Acrobat
O Trypanosoma evansi é o agente etiológico da doença conhecida como mal das cadeiras ou ?Surra?. Trata-se de uma doença de extrema importância, pois a mesma causa grandes prejuízos econômicos na pecuária de alguns países. Diferentes espécies de animais são acometidas por esse agente e o grau de severidade varia de acordo com o hospedeiro. A principal espécie afetada são os equinos os quais apresentam diferentes sinais clínicos de acordo com a evolução da doença. A forma mais grave ocorre quando o parasito atinge o sistema nervoso central provocando dificuldade de locomoção. Esse é o sinal clínico mais característico dessa doença, porém sinais inespecíficos como anemia, imunossupressão, icterícia e queda na produção também podem ser observados. A interação do parasito com o hospedeiro é realizada através do contato entre as células do sistema imune do hospedeiro e as proteínas de superfície do protozoário. Com objetivo de conhecer mais detalhadamente essa interação, proteínas de superfície do T. evansi foram solubilizadas com o uso do Triton X-114 e analisadas. Para istoT. evansi mantidos criopreservados foram utilizados para a infecção experimental de camundongos, sendo a inoculação realizada intra-peritonealmente em triplicatas biológicas. A infecção desses animais foi acompanhada diariamente através de esfregaços sanguíneos corados por panótico e visualizados em microscópio óptico. A purificação do parasito foi realizada com Percoll® seguida de cromatografia em coluna de DEAE-celulose equilibrada com PBS-glicose. Após este procedimento os T. evansi foram armazenados no freezer -80°C para posterior extração das proteínas. As proteínas de superfície foram extraídas de acordo com protocolo estabelecido anteriormente. As proteínas foram analisadas por LC-ESI-MS/MS para identificação no Centers for Disease Control and Prevention (CDC) em Atlanta-EUA. O resultado foi interpretado utilizando-seo MASCOT e o banco de dados de sequências gênicas doTrypanosoma evansi e Trypanosoma brucei. Com essas análises foi possível identificar 439 proteínas somente na fração rica em proteínas de membrana. Algumas proteínas de interesse foram selecionadas e analisadas por bioinformática para obtenção de dados sobre a predição de sua localização e possível presença de epitopo. Com o intuito de avaliar o reconhecimento de proteínas específicas através de imunoblot foi desenvolvido anticorpo policlonal contra T.evansi. Esse anticorpo foi produzido em ratos Wistar através de inoculações sucessivas de proteínas totais de T.evansi com adjuvante de Freund completo e incompleto de acordo com o protocolo. O soro foi testado e apresentou uma titulação de 1:2000, reconhecendo proteínas específicas na fração enriquecida com proteínas de membrana
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