Diagnóstico da Leishmaniose Visceral utilizando proteínas de Leishmania infantum com função desconhecida

• Autor(a) principal: Aliani Moura Fonseca
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-975K5U
• topic: Leishmania infantum; Anticorpos; Proteína recombinante; ELISA; Parasitologia

Leishmania (Ross, 1903) é um parasito protozoário de grande importância médica e veterinária. A Leishmaniose Visceral (LV), também conhecida como Calazar, é caracterizada por febre alta, substancial perda de peso, esplenomegalia, hepatomegalia e anemia. Pode levar à morte se não tratada. A espécie causadora da doença no Brasil é L. infantum (L. chagasi). A LV era, primariamente, uma zoonose caracterizada como doença eminentemente rural. Nos últimos anos, vem se expandindo para áreas urbanas de médio e grande porte e se tornou crescente problema de saúde pública no Brasil. O cão é identificado como reservatório de L. infantum, devido a sua susceptibilidade para a infecção e pelo alto parasitismo na pele. O controle epidemiológico da LV no Brasil envolve a eliminação de cães soropositivos, uso de inseticida nas casas e regiões do peridomicílio e o tratamento sistemático de casos humanos. Os testes sorológicos usados freqüentemente para triagem dos cães são: o Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e o Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Contudo, essas técnicas apresentam limitações quanto à reprodutibilidade e especificidade. Durante os últimos anos, nosso grupo vem desenvolvendo um estudo proteômico de L. infantum para a busca de novos antígenos para métodos diagnósticos que sejam mais específicos e capazes de detectar tanto a fase aguda quanto a crônica da infecção. Esse ensaio nos permitiu identificar, dentre outras, proteínas hipotéticas com potencial uso no diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) que foram utilizadas para a realização do presente projeto. Foram selecionadas duas proteínas hipotéticas (C8 e C1) que foram produzidas de forma recombinante, utilizando como vetor o plasmídeo Pet-TeV e como sistema de expressão Escherichia coli, cepa BL-21. Após a purificação por cromatografia de afinidade, as proteínas foram utilizadas como antígenos no teste sorológico para LV por ELISA. No ELISA com soros caninos, o antígeno C8 apresentou sensibilidade de 75% e especificidade de 90%, enquanto o antígeno C1 apresentou sensibilidade de 80% e especificidade de 60%. Por outro lado, no ELISA com soros humanos, os antígenos não foram eficientes para diferenciar pacientes positivos de negativos. Além disso, por estarmos trabalhando com proteínas não caracterizadas de Leishmania, foram produzidos anticorpos policlonais em coelhos para serem utilizados posteriormente em ensaios de expressão e localização celular.