Estudo da variabilidade genética intraespecífica de Leishmania (Leishmania) infantum em amostras de cães e humanos

• Autor(a) principal: Thais Almeida Marques da Silva
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-979GRZ
• topic: Minas Gerais; Brasil; Variabilidade intraespecífica; PCR-RFLP; Belo Horizonte; Leishmania (Leishmania) infantum; Parasitologia; Leishmania infantum; Variabilidade genética; Leishmania; Polimorfismo de fragmento de restrição; Reação em cadeia de polimerase

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença distribuída mundialmente e potencialmente fatal para o homem se não diagnosticada e tratada precocemente. Além de humanos a LV acomete outros mamíferos, especialmente cães, que no contexto urbano são os principais reservatórios da doença. Indivíduos portadores da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) também são considerados grupos susceptíveis para LV e merecem uma maior atenção. O município de Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil possui um dos maiores índices de letalidade humana por LV no país, além de uma alta prevalência da doença em cães. A Leishmania (Leishmania) infantum é o agente etiológico da LV no Brasil e o objetivo central deste trabalho foi estudar a variabilidade genética intraespecífica de parasitos provenientes de casos humanos e caninos do município de Belo Horizonte e de alguns municípios próximos com o uso da técnica de PCR-RFLP e diferentes alvos gênicos: kDNA e gp63. Para este trabalho foram avaliadas 47 amostras de DNA extraídos de amostras clínicas (n=35) e de cultura de L. infantum (n=12), sendo que estas amostras eram provenientes de três grupos diferentes: adultos (n=16), crianças (n=18) e cães (n=13). As amostras foram amplificadas para o alvo kDNA com os iniciadores MC1 e MC2, específicos para o Complexo Leishmania donovani, e que geram um fragmento de 447pb (pares de base). Para o alvo da glicoproteína gp63 foram utilizados os iniciadores Sg1 e Sg2, que geram um fragmento de 1330pb. Para avaliação por RFLP do alvo kDNA foram usadas cinco endonucleases de restrição, sendo elas: VspI, RsaI, BglII, DdeI e Hpa II. Para avaliação por RFLP do alvo da glicoproteína gp63 foram usadas duas endonucleases, sendo elas: Hinc II e TaqI. Os padrões de restrição enzimática das 47 amostras de DNA obtidos com as enzimas RsaI, BglII, DdeI, Hpa II, HincII e TaqI, revelaram-se monomórficos. Dois perfis distintos puderam ser identificados com a enzima VspI: Tipo I (apresentado por 46 amostras de DNA) e Tipo II (apresentado por apenas uma amostra de DNA avaliada no estudo). Este mesmo resultado foi também visualizado por análise de fenograma, construído com matriz binária e agrupamento Neighbor-Joining. A amostra variável é proveniente de indivíduo adulto, que apresentou quadro clássico de LV, residente do município de Minas Novas-MG, não pertencente à Região Metropolitana de Belo Horizonte. Esses achados revelam um alto grau de homogeneidade entre amostras de Leishmania isoladas de casos humanos e caninos de Belo Horizonte e outros municípios de Minas Gerais, Brasil.