Aspectos parasitológicos, imunológicos e moleculares da resposta dependente do receptor do tipo Toll 9 na infecção experimental por cepas de diferentes linhagens de Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Rodrigo de Almeida e Lourdes
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9DKDWW
• topic: Parasitologia; Parasitologia

Receptores do tipo Toll (TLR) são importantes componentes do sistema imune inato, responsáveis pelo reconhecimento de Padrões Moleculares Associados a Patógenos (PAMPs). TLR9 foi inicialmente identificado como responsável pelo reconhecimento de motivos CpG não metilados derivados do DNA genômico de bactéria e vírus. Mais recentemente, também foi demonstrado que o DNA genômico de alguns tripanosomatídeos, como Trypanosoma cruzi, apresenta atividade imunoestimulatória TLR9 dependente, e que este receptor é essencial no reconhecimento dos parasitos e na resistência do hospedeiro em infecções experimentais. Estudos prévios realizados pelo nosso grupo permitiram a identificação de sequências imunoestimulatórias contendo motivos CpG no genoma da cepa CL Brener de T. cruzi. Estas sequências não estão distribuídas aleatoriamente no genoma, mas enriquecidas em regiões contendo clusters gênicos codificadores de proteínas de superfície e outras sequências T. cruzi específicas. Estas regiões são altamente polimórficas nos dois haplótipos da cepa híbrida CL Brener, o que nos levou a especular que a abundância destes motivos CpG poderia variar no genoma das diferentes cepas de T. cruzi, podendo assim contribuir para uma ativação diferencial de TLR9 e, por consequência, um padrão diferencial de resposta imune, importantes no controle de parasitemia. A fim de testar esta hipótese, no presente trabalho, estudamos a importância de TLR9 na infecção causada por cepas de T. cruzi pertencentes a diferentes linhagens evolutivas: Colombiana (TcI), Y (TcII) e CL Brener (TcVI). Estas cepas foram selecionadas para este estudo por apresentarem padrão de parasitemia e virulência bastante distintos na infecção experimental. Nossos resultados indicam uma menor importância de TLR9 no controle da infecção com a cepa Colombiana, quando comparado com as infecções com CL Brener e Y, visto que camundongos TLR9-/- infectados com as duas últimas, apresentaram aumento da parasitemia e maior mortalidade quando comparados aos animais selvagens, o que não foi visto nas infecções com a cepa Colombiana. Ensaios imunoestimulatórios usando macrófagos e células dendríticas de camundongos C57BL/6 e TLR9-/- com quantidades iguais de DNA genômico das diferentes cepas não revelaram diferenças na produção de óxido nítrico e IL-12 entre as cepas. Entretanto, ensaios de estimulação com células dendríticas incubadas com o mesmo número de formas tripomastigotas vivas das três cepas de T. cruzi mostraram que a diferença da produção de TNF- e IL-12 entre células provenientes de camundongos selvagens e células de TLR9-/- foi menor para a cepa Colombiana do que para outras cepas. Estes resultados corroboram a hipótese de que a cepa Colombiana possui menores quantidades de motivos CpG imunoestimulatórios em seu genoma, quando comparadas as cepas CL Brener e Y e sugerem possíveis diferenças no tamanho dos genomas das três cepas. Esta hipótese foi confirmada através do sequenciamento do genoma das cepas Y e Colombiana e análises comparativas com o genoma da cepa CL Brener. As cepas CL Brener e Y apresentam uma maior abundância de motivos CpG que apresentam alta capacidade imunoestimulatória, enquanto que o genoma de Colombiana é enriquecido com motivos CpG com menor capacidade imunoestimulatória. Análises comparativas incluindo os genomas das cepas Sylvio (TcI), Arequipa (TcI), Esmeraldo (TcII) e Tulahuén (TcVI) revelam que o padrão de abundância deste motivos CpG imunoestimulatórios é conservado dentro das diferentes linhagens evolutivas do parasito. Em conjunto estes resultados revelam que a infecção causada por diferentes cepas de T. cruzi promove uma ativação diferencial do receptor TLR9, gerando uma produção variável de citocinas pró-inflamatórias que são necessárias para a diminuição de parasitemia. O conteúdo de motivos CpG imunoestimulatórios nos genomas das diferentes cepas de T. cruzi é, portanto, um importante fator que afeta a virulência, patogênese, e adaptação do parasito ao hospedeiro vertebrado.