Estudo de diferentes protocolos utilizando lipoproteínas de baixa densidade na criopreservação do sêmen eqüino

• Autor(a) principal: Geraldo Cesar Juliani Santos
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-ARLNZD
• topic: dimetilformamida; equino; criopreservação; lipoproteína de baixa densidade; osmolaridade; Reprodução animal; Equino Espermatozóides; Sêmen Criopreservação; Equino Reprodução; Lipoproteinas

Os protocolos de congelamento de sêmen equino não são padronizados e com isso o sucesso dessa técnica varia substancialmente. O Experimento 1 teve como objetivo determinar se a substituição da gema de ovo total pela fração de lipoproteínas de baixa densidade do ovo no diluidor exerce um efeito crioprotetor mais eficaz sobre a célula espermática equina e qual a concentração mais indicada. O Experimento 2 buscou-se avaliar a forma de adição da dimetilformamida nos diluidores testados no Experimento 1, bem como o efeito da osmolaridade do meio base sobre a qualidade espermática após o descongelamento. Para o Experimento 1, os ejaculados de 7 garanhões foram congelados em duas curvas de congelamento, uma rápida (palhetas mantidas a 3 cm do nível do nitrogênio líquido, durante 15 minutos) e uma lenta (queda de 0,5oC/min. até 5,0oC, e queda de 20oC/min. até - 120oC, obtida em máquina computadorizada, Modelo TK 2000 TETAKON NUTRICELL); utilizando dois crioprotetores, glicerol ou dimetilformamida em diferentes concentrações de lipoproteínas de baixa densidade. Foram testados: T1: INRA 82, com 5% de glicerol (controle), T2: INRA 82, com 5% de glicerol e 5% de LBD, T3: INRA 82, com 5% de glicerol e 10% de LBD, T4: INRA 82, com 5% de glicerol e 20% de LBD, T5: INRA 82, com 5% de dimetilformamida e 5% de LBD, T6: INRA 82, com 5% de dimetilformamida e 10% de LBD, T7: INRA 82, com 5% de dimetilformamida e 20% de LBD, T8: INRA 82, com 5% de dimetilformamida (controle). Para o Experimento 2, seis ejaculados foram congelados nos seguintes diluidores testados: D1: INRA 82, com 20% de LBD a 300mOsmol/L e 5% de DMF; D2: INRA 82, com 20% de LBD a 400mOsmol/L e 5% de DMF; D3: INRA 82, com 2% de gema ovo a 300mOsmol/L e 5% de DMF; D4: INRA 82, com 2% de gema ovo a 400mOsmol/L e 5% de DMF. Nesse caso os 4 diluidores testados foram feitos em duplicata, tendo sido adicionada a dimetilformamida em fração única ou fracionada ao longo do tempo. Em ambos experimentos o descongelamento foi feito a 52oC por 10 segundos, seguidos de imersão em banho-maria a 37oC por 30 segundos. Após o descongelamento foram avaliados os parâmetros de motilidade total, motilidade progressiva e vigor espermático em microscopia óptica. Foram avaliadas as integridades funcionais e estruturais dos espermatozóides através dos testes hiposmótico e de fluorescência respectivamente. Os espermatozóides foram submetidos ao teste de termo resistência. A análise estatística foi realizada utilizando ANOVA, com delineamento de blocos ao acaso, e comparação entre médias por Teste Tukey. No Experimento 1, as lipoproteínas de baixa densidade, utilizadas nas concentrações de 10 e 20% mostraram ser tão eficientes em proteger os espermatozóides quanto a gema de ovo integral usada no INRA 82. A curva lenta foi superior a curva rápida para os parâmetros motilidade total, motilidade progressiva, vigor espermático, teste hiposmótico e teste de termo resistência, independente do crioprotetor utilizado. A dimetilformamida foi superior ao glicerol, nas duas curvas de congelamento, nas avaliações de motilidade total, motilidade progressiva, morfologia espermática, teste hiposmótico, número de espermatozóides lesados e teste de termo resistência. Para o Experimento 2, todos os parâmetros avaliados de viabilidade dos espermatozoides equinos criopreservados, exceto motilidade, foram aumentados pela adição fracionada de dimetilformamida juntamente com o uso de maior osmolaridade inicial do meio base.