Utilização de técnicas moleculares para o acompanhamento de pacientes cardiopatas chagásicos transplantados, como ferramenta para a identificação precoce de reativação da infecção

• Autor(a) principal: Priscilla Almeida da Costa
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B5SFN8
• topic: Imunologia; Bioquímica; Bioquímica e imunologia

A doença de Chagas é considerada a 3a infeção parasitária mais comum no mundo, vindo depois apenas da malária e da esquistossomose (WHO 2005). Estima-se que 7 a 8 milhões de pessoas estão infectadas, sendo responsável por 12 mil mortes por ano (WHO, 2014). Cerca de 20 à 30% das pessoas infectadas manifestam a forma grave da doença, desenvolvendo complicações cardíacas que podem conduzir a insuficiência cardíaca ou morte súbita (Britto et al., 2009). Os fatores que determinam as diferentes manifestações clínicas e os que levam às formas leve ou grave da doença ainda não estão completamente esclarecidos, assim como é desconhecido o motivo pelo qual alguns pacientes cardiopatas chagásicos, submetidos ao transplante cardíaco, apresentam reativação da doença e outros não. Estima-se que haja uma contribuição relevante atribuída aos aspectos genéticos do parasito. O transplante de coração é uma opção terapêutica válida para o paciente portador de cardiopatia chagásica crônica em seu estágio mais avançado. No entanto, após o transplante, o diagnóstico diferencial de rejeição celular do implante ao da reativação da infecção chagásica, tem sido considerado difícil, impossibilitando o tratamento correto. No presente estudo, avaliamos a possibilidade de utilização de metodologias baseadas em PCRs direcionados para marcadores nucleares (rDNA 24S) e mitocondriais (kDNA) para diagnóstico precoce da presença de Trypanosoma cruzi no coração de pacientes chagásicos transplantados. Além de caracterizarmos as populações de T. cruzi de I a VI nas amostras positivas, utilizando testes sequenciais de PCR, baseado em 3 marcadores: o gene COII, o espaçador intergênico do gene miniéxon e gene rDNA 24S, para avaliarmos se há ocorrência de linhagens de T. cruzi mais associadas a reativação. De 2008 a 2014, foram analisadas 497 biópsias endomiocárdicas, derivadas de 58 pacientes chagásicos cardíacos submetidos a transplante cardíaco do Hospital das Clínicas da UFMG. O DNA de T. cruzi foi detectado em 111 amostras e aproximadamente 62% dos pacientes apresentaram algum resultado positivo para um dos testes de diagnóstico molecular realizado. Com a tipagem dessas 111 amostras positivas para presença de T. cruzi, verificamos que a maioria dos pacientes tiveram reativação por T. cruzi II, apoiando a ideia de que esta é a principal linhagem associada a forma cardíaca e a reativação da doença da Chagas, pelo menos nesta região geográfica. O seguimento clínico dos pacientes, revelou que dos 36 pacientes positivos para pelo menos um dos testes moleculares, 29 apresentaram reativação clínica da doença de Chagas. Deste modo, existe uma boa intensidade de associação (80,55%) entre os resultados obtidos por PCR para kDNA e PCR em tempo real para rDNA 24S e a reativação clínica da doença. Além disso, resultados positivos foram obtidos já nas primeiras biópsias endomiocárdicas realizadas, antecipando 1 a 32 meses a reativação clínica, o que indica que a PCR pode contribuir para o diagnóstico precoce de reativação da doença Chagas, com potencial para auxiliar nas decisões de tratamento.