O papel de TGHDAC-2 em Toxoplasma gondii

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Siqueira, Caroline de Moraes de
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/41608
Resumo: Orientador: Sheila Cristina Nardelli
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spelling Siqueira, Caroline de Moraes deRocha, Wanderson Duarte daUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasNardelli, Sheila Cristina2022-08-22T13:24:05Z2022-08-22T13:24:05Z2015https://hdl.handle.net/1884/41608Orientador: Sheila Cristina NardelliCoorientador: Wanderson Da RochaMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Curso de Graduação em Ciências BiológicasResumo : Toxoplasma gondii pertence ao filo Apicomplexa e é o agente causador da toxoplasmose. Seu ciclo de vida é bastante complexo e alterna entre o seu hospedeiro definitivo, felinos, e o hospedeiro intermediário, animas de sangue quente, incluindo o homem. As formas de vida do parasita possuem diferentes perfis de expressão gênica que são fundamentais para a virulência e como mecanismo de adaptação nos diferentes hospedeiros. Nos últimos 15 anos, fatores epigenéticos tem sido associados como parte fundamental do controle da expressão gênica nestes parasitas, dentre eles a modificação em histonas que tem um papel especial na regulação gênica do parasita. T. gondii possui as 4 histonas canônicas conservadas, além de diversas enzimas remodeladoras de cromatina, que ordenadamente adicionam ou removem modificações pós-traducionais em histonas, afetando a arquitetura da cromatina e processos dependentes de DNA. Entre elas encontram-se as deacetilases de histona (HDACs), que removem o grupo acetil de lisinas acetiladas em histonas, e consequentemente tornam a cromatina mais compactada, silenciando a expressão dos genes. T. gondii possui sete HDACs, dentre elas a HDAC-2 que é o objeto do presente estudo.. Embora seja aparentemente uma HDAC clássica de classe I e similar aos demais eucariotos, a HDAC-2 de T. gondii possui duas inserções nucleotídicas que acrescentam 170 nucleotídeos dentro do domínio HDAC característico, que a tornam única de parasita do filo Apicomplexa e cuja função permanece desconhecida. Além disso, a expressão de HDAC-2 encontra-se aumentada durante a fase S do ciclo celular, conforme resultados presentes no banco de dados. Por ser tão singular, o objetivo principal desta pesquisa foi caracterizar a Histona Deacetilase-2 de Toxoplasma gondii, sua localização celular, bem como seu papel em processos dependentes de DNA, como replicação e regulação da expressão gênica do parasita. Para tanto, partimos para ensaios de etiquetamento da proteína endógena, utilizando uma repetição de 3x HA para localização da proteína por imunofluorescência. Porém após inúmeras tentativas de transfecção na cepa RH ?HX?Ku80 de T. gondii, não foi possível obter mutantes com a proteína etiquetada, e com isso os objetivos de identificar complexos e genes a ela associados não foram possíveis até o momento. Entretanto, o nocaute gênico foi obtido com sucesso por PCR de fusão, utilizando as regiões adjacentes ao gene hdac-2. Análises preliminares de imunofluorescência revelaram que parasitas HDAC-2 KO falham em deacetilar mais especificamente a histona H4, e não a histona H3. Adicionalmente, por meio de ensaio de formação de placa, observamos que as placas de lise nos parasitas KO são menores e em menor número, um dado que sugere que essa deacetilase está relacionada à replicação do parasita e possivelmente afete sua virulência. Confirmamos que o mRNA de hdac-2 possui splicing alternativo retendo o primeiro íntron. Até o momento, nossos dados indicam uma participação de HDAC-2 no processo de replicação do parasita, envolvendo possivelmente a deacetilação da histona H4, embora mais estudos devem ser feitos a fim de elucidar a função dessa deacetilase atípica em T. gondii.1 recurso online : PDF.application/pdfExigências do sistema: Adobe Acrobat ReaderToxoplasma gondiiO papel de TGHDAC-2 em Toxoplasma gondiiinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALMonografia Caroline de Moraes de Siqueira.pdfapplication/pdf1614173https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41608/1/Monografia%20Caroline%20de%20Moraes%20de%20Siqueira.pdf2be8100f0bc00a88205feaca6fb374e4MD51open accessTEXTMonografia Caroline de Moraes de Siqueira.pdf.txtExtracted Texttext/plain110850https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41608/2/Monografia%20Caroline%20de%20Moraes%20de%20Siqueira.pdf.txt46cd807e443258f91e9e5740c8846897MD52open accessTHUMBNAILMonografia Caroline de Moraes de Siqueira.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1195https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/41608/3/Monografia%20Caroline%20de%20Moraes%20de%20Siqueira.pdf.jpg41159215fb99de75446140cf02771f61MD53open access1884/416082022-08-22 10:24:05.139open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/41608Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-08-22T13:24:05Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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