Protocolo para resfriamento de embriões de Zebrafish durante até 12 horas

• Autor(a) principal: Chaves, Tales Fabris
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/265837
• topic: Metanol; Embrião animal; Criopreservação; Transporte de animais; Peixe; Metanol; Fish Embryos; Cryoprotectant; Transport

As técnicas de criopreservação e resfriamento de gametas e embriões têm atuado como importantes ferramentas na preservação de diversas espécies aquáticas, cuja necessidade de medidas que atendam suas condições específicas é crescente. Atualmente, diversos protocolos estão sendo testados na tentativa de elencar a melhor forma de conservação de embriões de peixes teleósteos. O transporte de material genético entre laboratórios e estabelecimentos contribuirá diretamente com as pesquisas, estabelecendo linhagens genéticas específicas e auxiliando na conservação de espécies. O Zebrafish (Danio rerio) é um modelo experimental muito utilizado, por ter transparência embrionária e facilitar análises e estudos por observação ocular, dando acesso a circulação e transporte de substâncias. O objetivo desse trabalho é otimizar um protocolo para resfriamento de embriões de zebrafish (Danio rerio), considerando aspectos como taxa de eclosão e comportamento larval, contribuindo com sua preservação, bem como o estudo do resfriamento em embriões de peixes e biotecnologias de transporte de embriões. Utilizando a proporção de 2 fêmeas para cada macho (2F:1M) a reprodução foi induzida, e os embriões coletados. Na condição de 50% de Epibolia (n=20) era feita a distribuição em três soluções (1M Metanol + 0,1M Sacarose, PBS e Água de Incubação), e controle, contendo 40 ml por Falcon em três tempos de resfriamento (6, 12 e 24 horas), posteriormente reaquecidos e incubados a 28,3°C ± 0,8 em Placas Petri com 25 mL de água de incubação para as análises até da abertura de boca, onde foram avaliadas taxas de batimento cardíaco, taxa de eclosão e retardo. Em 96 horas pós-fecundação, as larvas eram levadas para aquários, para análises comportamentais, sobrevivência e deformidade, ficando nesta condição até o final do experimento em 15 dias pós- fecundação. O tratamento 1M Metanol + 0,1M Sacarose alcançou 12 horas de resfriamento com as mesmas taxas de eclosão que o controle. Porém, o tratamento com crioprotetor também revelou um aumento considerável no batimento cardíaco por minuto (bpm) dos embriões, o que reduziu o tempo de retardo causado pelo resfriamento. As taxas de deformidade e sobrevivência também revelaram que 1M Metanol + 0,1M Sacarose não possuem diferença estatística com o controle por até 12 horas de resfriamento. Os embriões mantidos por 24 horas de resfriamento não suportaram. O protocolo pode ser utilizado como peça fundamental para comercialização/ compartilhamento de linhagens genéticas específicas de Zebrafish, por até 12 horas, auxiliando na pesquisa farmacológica e avanço da pesquisa científica. O trabalho realizado abre portas para estudos que podem ser realizados visando produzir novas tecnologias para o transporte econômico e viável de embriões de peixes.