Isolamento e identificação microscópica e molecular de actinobactéria componente de consórcio microbiano termofílico quimiolitoautotrófico obtido do solo

• Main Author: Moreira, Roberto Guardatti Gambine
• Publication Date: 2018
• Format: Bachelor thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFRJ
• Download full: http://hdl.handle.net/11422/19382
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Actinobacteria; Cultura axênica; Extremófilos; Axenic culture; Extremophiles

Microrganismos são capazes de colonizar os mais diversos ambientes e resistir às mais extremas condições. Centenas de milhões de anos de evolução fizeram com que estes seres se distribuíssem ubiquitariamente pelo planeta, habitando locais onde a vida macroscópica não seria possível. O fruto da adaptação às mais diversas e excepcionais circunstâncias é uma imensa diversidade metabólica com potencial biotecnológico industrialmente interessante, principalmente no caso de microrganismos extremófilos. No entanto, antes que se possa aplicá-los, é necessário encontrá-los e estudá-los. Ao redor desse aspecto consiste um dos principais desafios da microbiologia ambiental: a obtenção de uma cultura pura. Estudos de boa anotação genômica, manipulação genética e caracterização de novas espécies, só são possíveis através desta ação. O surgimento das técnicas moleculares possibilitou estudos que revelaram a porcentagem de microrganismos não-cultivados, sendo ela superior à 99%. Também, tais métodos permitem estudos independentes do cultivo, porém não são capazes de contornar todos os obstáculos da não-cultivabilidade. Portanto, a obtenção de culturas axênicas persiste como um desafio atual e novas técnicas e métodos são necessários para acessar a chamada "matéria negra microbiana". Pautado nessa questão, este trabalho é um desdobramento de trabalhos previamente realizados cujos resultados foram a obtenção de um consórcio microbiano termofílico quimiolitoautotrófico de uma amostra de solo destinado à queima de rejeitos vegetais. Seus objetivos consistiam em encontrar um sistema alternativo de fixação de nitrogênio aerotolerante, descrito como possível na literatura por Gadkari et al em 1997, porém sem descrições comprobatórias posteriores. A suposta nitrogenase seria pertencente à actinobactéria Streptomyces thermoautotrophicus, isolada também por Gadkari em 1992 e identificada como presente no consórcio deste trabalho por análises metagenômicas. No entanto, tentativas anteriores de isolar o componente de interesse foram mal sucedidas e permaneceram como um empecilho cuja superação foi o objetivo deste trabalho. A utilização de meios de cultura diferenciados associado a antibióticos para eliminar contaminantes revelou-se uma estratégia bem sucedida, levando à obtenção de uma cultura axênica da actinobactéria ao final dos experimentos. Testes de quimiolitoautotrofia apontam uma possível capacidade de fixação de nitrogênio em tensões de oxigênio por parte da actinobactéria embora análises aprofundadas sejam necessárias. Análises taxonômicas associaram o isolado ao Streptomyces thermoautotrophicus mas não permitiram uma caracterização precisa, havendo associação com diversas bactérias não cultivadas, indicando que a cepa obtida pode ser pertencente a outro gênero ou família taxonômica.