Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro
| Autor(a) principal: | |
|---|---|
| Data de Publicação: | 2010 |
| Tipo de documento: | Dissertação |
| Idioma: | por |
| Título da fonte: | Repositório Institucional da UnB |
| Texto Completo: | http://repositorio.unb.br/handle/10482/7432 |
Resumo: | Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. |
| id |
UNB_3278bbc43f978114af9571523d693445 |
|---|---|
| oai_identifier_str |
oai:repositorio2.unb.br:10482/7432 |
| network_acronym_str |
UNB |
| network_name_str |
Repositório Institucional da UnB |
| repository_id_str |
|
| spelling |
Ferreira, Allice RodriguesFranco, Maurício Machaim2011-04-17T17:19:36Z2011-04-17T17:19:36Z2011-04-172010-12-15FERREIRA, Allice Rodrigues. Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro. 2010. xvii, 51 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Animais)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010.http://repositorio.unb.br/handle/10482/7432Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010.O cultivo in vitro de embriões afeta mecanismos epigenéticos envolvidos no controle da expressão de genes relacionados ao desenvolvimento embrionário e inativação do cromossomo X. Fêmeas de mamíferos têm dois cromossomos X, e machos somente um. Isto levou à criação de um mecanismo evolutivo de compensação de dose, chamado inativação do cromossomo X. Durante a embriogênese, um dos dois cromossomos X é aleatoriamente inativado em cada célula da massa celular interna, e preferencialmente o paterno no trofoblasto. O objetivo deste estudo foi estabelecer o padrão de inativação do cromossomo X, avaliando a expressão alelo específica do gene MAO-A (monoamina oxidase tipo A) em embriões bovinos produzidos in vitro nos estádios de quatro células, oito a dezesseis células, mórula, blastocisto e blastocisto expandido. Um total de 100 embriões foi produzido in vitro (PIV), utilizando ovócitos aspirados de nove novilhas da raça Nelore homozigotas para o alelo A, inseminados com sêmen de um touro Holandês homozigoto para o alelo G sexado para fêmea, previamente genotipados para o gene MAO-A. Dois pools com 10 embriões cada, dos estágios de 4 células, 8-16 células, mórula, blastocisto e blastocisto expandido foram coletados. Esses pools de embriões foram congelados a -80°C para posterior extração de RNA total. Um pool de 15 ovócitos maturados e 5 palhetas de espermatozóides foi utilizado para extração de RNA. Para a fenotipagem do gene MAO-A nos pools de embriões foi utilizada a técnica de RT-PCR-RFLP. Para isso foram desenhados dois pares de primers flanqueando uma região específica do gene (GenBank accession number NM_181014.2) com um polimorfismo, permitindo assim a detecção da expressão alelo específica (Bos taurus taurus X Bos taurus indicus), ou seja, permitindo detectar qual alelo, se paternal ou maternal estava sendo expresso. Um produto de amplificação foi gerado por RT-PCR com os primers externos de cada pool de embriões de cada estágio de desenvolvimento e purificado. xv Posteriormente, os fragmentos foram sequenciados pela metodologia de dideoxy em um sequenciador ABI 3130xl (Applied Biosystem) usando os primers internos foward. O RNA total extraído das células espermáticas e ovócitos maturados foram utilizados para a detecção da presença do RNA mensageiro do gene MAO-A por RT-PCR. Os resultados mostraram que ambos os alelos estão expressos em embriões de 4-células, 8-16-células, blastocisto e blastocisto expandido, com a expressão do X paterno desaparecendo em mórula. Pode-se especular que ambos os cromossomos X estão ativos nos dois estádios iniciais, sendo inativados posteriormente e reativados em blastocisto. ________________________________________________________________________________ ABSTRACTEmbryo culture system may affect epigenetic mechanisms involved in controlling gene expression related to embryo development and X chromosome inactivation. Female mammal has two X chromosomes, and male only one. This led to the creation of an evolutionary mechanism of dosage compensation, called X chromosome inactivation. During embryogenesis, one of two X chromosomes is randomly inactivated in each cell of the inner cell mass, and preferably the paternal chromosome in trophoblast cells. The objective of this study was to characterize the allele-specific expression of the Monoamine Oxidase type A (MAO-A) X-linked gene, during preimplantational development of bovine embryos produced in vitro. One hundred in vitro embryos were produced using oocytes aspirated from nine heifers, homozygous for the MAO-A A allele, which were inseminated using X-semen sexed from a Holstein bull homozygous for the G allele. Two pools of 10 embryos each of 4 cell, 8- 16 cell, morula, blastocyst and expanded blastocyst stages were collected. Embryos were frozen at -80 °C until total RNA extraction. Total RNA from sperm and oocytos were also isolated. For phenotyping of the MAO-A gene in the pools of embryos the RT-PCR-RFLP technique was used. Two pairs of primers, flanking a specific region of the gene (GenBank accession number NM_181014.2) carrying a single nucleotide polymorphism, were designed. Thus, the allele-specific expression was detected, identifying paternal and maternal MAO-A mRNA. Amplicons of each pool of embryos were produced by using RT-PCR, and they were sequenced by the dideoxy method using an ABI 3130 xl sequencer (Applied Biosystem). Total RNA isolated from sperm cells was used to detect MAO-A mRNA by using RT-PCR. Results showed the presence of mRNA from both alleles in 4-cell, 8-16-cell, blastocyst and expanded blastocyst embryos, and only from the maternal allele in morula. We can speculate xvii that both X chromosomes are active in the two earliest stages, being inactivated and subsequently reactivated in blastocyst.Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária (FAV)Programa de Pós-Graduação em Ciências AnimaisEstabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitroEstablishment of x chromosome inactivation in in vitro produced bovine embryosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisReprodução animalBovino - reproduçãoReprodução in vitroinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf2010_AlliceRodriguesFerreira.pdfapplication/pdf493312http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/1/2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf38d77029716a151f89050eea62646badMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1870http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/2/license.txtdcfd8341c69c0a60a2c53a7d95c10498MD52open accessTEXT2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf.txt2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf.txtExtracted texttext/plain117382http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/3/2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf.txteb5bb49d616e0803e246e377367186b0MD53open access10482/74322024-02-06 15:23:55.507open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-02-06T18:23:55Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false |
| dc.title.en.fl_str_mv |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| dc.title.alternative.en.fl_str_mv |
Establishment of x chromosome inactivation in in vitro produced bovine embryos |
| title |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| spellingShingle |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro Ferreira, Allice Rodrigues Reprodução animal Bovino - reprodução Reprodução in vitro |
| title_short |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| title_full |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| title_fullStr |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| title_full_unstemmed |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| title_sort |
Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro |
| author |
Ferreira, Allice Rodrigues |
| author_facet |
Ferreira, Allice Rodrigues |
| author_role |
author |
| dc.contributor.author.fl_str_mv |
Ferreira, Allice Rodrigues |
| dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Franco, Maurício Machaim |
| contributor_str_mv |
Franco, Maurício Machaim |
| dc.subject.keyword.en.fl_str_mv |
Reprodução animal Bovino - reprodução Reprodução in vitro |
| topic |
Reprodução animal Bovino - reprodução Reprodução in vitro |
| description |
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. |
| publishDate |
2010 |
| dc.date.submitted.none.fl_str_mv |
2010-12-15 |
| dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2011-04-17T17:19:36Z |
| dc.date.available.fl_str_mv |
2011-04-17T17:19:36Z |
| dc.date.issued.fl_str_mv |
2011-04-17 |
| dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| format |
masterThesis |
| status_str |
publishedVersion |
| dc.identifier.citation.fl_str_mv |
FERREIRA, Allice Rodrigues. Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro. 2010. xvii, 51 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Animais)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010. |
| dc.identifier.uri.fl_str_mv |
http://repositorio.unb.br/handle/10482/7432 |
| identifier_str_mv |
FERREIRA, Allice Rodrigues. Estabelecimento do padrão de inativação do cromossomo x em embriões bovinos produzidos in vitro. 2010. xvii, 51 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Animais)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010. |
| url |
http://repositorio.unb.br/handle/10482/7432 |
| dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
| language |
por |
| dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
| eu_rights_str_mv |
openAccess |
| dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UnB instname:Universidade de Brasília (UnB) instacron:UNB |
| instname_str |
Universidade de Brasília (UnB) |
| instacron_str |
UNB |
| institution |
UNB |
| reponame_str |
Repositório Institucional da UnB |
| collection |
Repositório Institucional da UnB |
| bitstream.url.fl_str_mv |
http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/1/2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/2/license.txt http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/7432/3/2010_AlliceRodriguesFerreira.pdf.txt |
| bitstream.checksum.fl_str_mv |
38d77029716a151f89050eea62646bad dcfd8341c69c0a60a2c53a7d95c10498 eb5bb49d616e0803e246e377367186b0 |
| bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
| repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB) |
| repository.mail.fl_str_mv |
|
| _version_ |
1797405376220495872 |