Avaliação de alternativas de meio de cultivo para a produção da eritropoetina humana recombinante expressa em células CHO em suspensão

• Autor(a) principal: Murad, Alexandre Borges
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25103
• topic: Células CHO; Eritropoetina; Meios de Cultivo Condicionados; Processos de Crescimento Celular

Com o avanço das técnicas de biologia molecular, os cultivos celulares passaram a ser uma importante plataforma para a produção dos biofármacos, que são proteínas recombinantes com fins terapêuticos, obtidos através de processos biotecnológicos. A manutenção das condições ideais de cultivo é de grande importância para a obtenção do produto conforme especificações de qualidade e requisitos de segurança. Desta forma, os meios de cultivo promovem o ambiente e fornecimento de nutrientes ideais às células, garantindo o funcionamento normal do metabolismo, do crescimento celular e a correta síntese do biofármaco. Neste projeto foi realizada a comparação de diferentes alternativas de meios de cultivo comerciais, livres de soro fetal bovino e componentes animais, com o meio de cultivo atualmente utilizado para o cultivo em suspensão de células CHO secretoras de EPOhr, observando-se a capacidade de promoção de crescimento, produtividade da molécula e metabolismo. Os experimentos foram conduzidos a partir do descongelamento de criotubos de um banco de células de trabalho, com células CHO secretoras de EPOhr. As células foram adaptadas em diferentes meios de cultivo e em sistemas de cultivo de frascos e garrafas Ao final da etapa de adaptação direta, foram realizadas cinéticas comparativas com o meio utilizado atualmente. As cinéticas (candidato e controle) foram iniciadas a partir da última etapa de adaptação, durando de quatro a nove dias, dependendo das condições de cultivo. Dos meios testados, três apresentaram condições melhores ou iguais ao do meio padrão SFM4CHO\2122 - Utility. Os meios SFM4CHO\2122 e Cellvento\2122 CHO-110 apresentaram melhor capacidade de promoção de crescimento (2,42x106 células/mL e 4,6x106 células/mL, respectivamente), enquanto o meio CPCHO\2122 apresentou maior produtividade e taxa específica de formação da EPOhr (P = 12,16 \03BCg/dia e qEPOhr = 7,3 \03BCg/106 células/dia, respectivamente). Os meios de cultivo SFM4CHO\2122 e Cellvento\2122 CHO-110 apresentaram boa capacidade de sustentar a proliferação, alcançando concentração máxima de células viáveis superior ao meio de cultivo controle, indicando possuir melhor promoção de crescimento. O meio CPCHO\2122 apresentou melhor produção de EPOhr, em comparação ao meio de cultivo padrão. Os resultados sugerem que os três meios mencionados acima podem ser mais estudados para embasar o seu uso como alternativa de matéria prima numa eventual substituição de meio de cultivo, como a descontinuação do meio atualmente utilizado no processo.