Identificação de Peptídeos para o Desenvolvimento de um Teste Diagnóstico Sorológico para Zika
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Data de Publicação: | 2022 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55306 |
Resumo: | O Zika virus (ZIKV), assim como o Dengue virus (DENV) e o Yellow Fever virus (YFV), membros da família Flaviviridae, compartilham alta homologia entre as suas sequências genômicas, aumentando a possibilidade de reações imunológicas cruzadas entre eles, tornando complexa a identificação de epítopos e anticorpos específicos para os flavivírus. A infecção por ZIKV está relacionada com complicações neurológicas graves em recém-nascidos, como a microcefalia e a Síndrome de Guillan-Barret, em adultos, o que causou sérios problemas de saúde pública no Brasil em 2015 e 2016. Neste mesmo momento, circulavam no Brasil, outros arbovírus, transmitidos pelos mesmos vetores, como o DENV, YFV e o Chikungunya virus (CHIKV). Inicialmente as doenças causadas pelos arbovírus apresentam sintomas muito similares, mas quando agravadas, caminham para desfechos diferentes, que necessitam de um manejo clínico e assistência hospitalar distintos. Desta forma, é importante o desenvolvimento de um teste diagnóstico diferencial precoce que seja sensível e específico o bastante para identificar estas doenças em sua fase inicial. Este trabalho tem como objetivo a identificação de regiões específicas da poliproteína do ZIKV que possam ser utilizadas como antígenos diferenciais em um teste diagnóstico para Zika. Para isso, foi traçada a seguinte metodologia: (i) utilizando a bioninformática como ferramenta, foi criado um banco de dados próprio para o estudo de epítopos antigênicos específicos e potencialmente diferenciais entre o ZIKV, DENV e YFV; (ii) foram selecionados, desenhados e sintetizados peptídeos antigênicos e específicos destes flavivírus; 3) foi realizada uma varredura dos peptídeos obtidos a partir de microarranjo proteico, avaliando a capacidade de reconhecimento específico por anticorpos presentes em 260 amostras de soros humanos, caracterizados em quatro grupos distintos: I – positivos para Zika, II – positivos para dengue, III – positivos para febre amarela, IV – negativos para as arboviroses testadas. Dentre os peptídeos testados, um peptídeo identificado na proteína do capsídeo de ZIKV apresentou resultados relevantes de reconhecimento específico e diferencial entre as amostras positivas para Zika e os outros grupos. Especialmente quando comparados os grupos positivos para Zikae dengue, este peptídeo foi eficiente em distinguir os grupos com sensiblidade de 100% e especificidade de 88,37%. Portanto, espera-se que este peptídeo possa ser utilizado no desenvolvimento de um teste diagnóstico sorológico diferencial e específico para Zika. |
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Colombarolli, Stella GarciaOliveira, Jaquelline Germano deSilva, Carlos Eduardo CalzavaraFernandes, Gabriel da RochaLage, Anna Carolina PinheiroDhalia, RafaelCunha, Mariana SequetinSilva, Carlos Eduardo Calzavara2022-10-25T15:31:35Z2022-10-25T15:31:35Z2022COLOMBAROLLI, Stella Garcia. Identificação de Peptídeos para o Desenvolvimento de um Teste Diagnóstico Sorológico para Zika. Orientação: Calzavara Silva, Carlos Eduardo , Coorientação: Oliveira, Jaquelline Germano de. Belo Horizonte: s.n., 2022. 75 p. cd. Tese(Doutorado em Ciências da Saúde. Área de Concentração: Biologia Celular e Molecular, Genética e Bioinformática)-Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55306O Zika virus (ZIKV), assim como o Dengue virus (DENV) e o Yellow Fever virus (YFV), membros da família Flaviviridae, compartilham alta homologia entre as suas sequências genômicas, aumentando a possibilidade de reações imunológicas cruzadas entre eles, tornando complexa a identificação de epítopos e anticorpos específicos para os flavivírus. A infecção por ZIKV está relacionada com complicações neurológicas graves em recém-nascidos, como a microcefalia e a Síndrome de Guillan-Barret, em adultos, o que causou sérios problemas de saúde pública no Brasil em 2015 e 2016. Neste mesmo momento, circulavam no Brasil, outros arbovírus, transmitidos pelos mesmos vetores, como o DENV, YFV e o Chikungunya virus (CHIKV). Inicialmente as doenças causadas pelos arbovírus apresentam sintomas muito similares, mas quando agravadas, caminham para desfechos diferentes, que necessitam de um manejo clínico e assistência hospitalar distintos. Desta forma, é importante o desenvolvimento de um teste diagnóstico diferencial precoce que seja sensível e específico o bastante para identificar estas doenças em sua fase inicial. Este trabalho tem como objetivo a identificação de regiões específicas da poliproteína do ZIKV que possam ser utilizadas como antígenos diferenciais em um teste diagnóstico para Zika. Para isso, foi traçada a seguinte metodologia: (i) utilizando a bioninformática como ferramenta, foi criado um banco de dados próprio para o estudo de epítopos antigênicos específicos e potencialmente diferenciais entre o ZIKV, DENV e YFV; (ii) foram selecionados, desenhados e sintetizados peptídeos antigênicos e específicos destes flavivírus; 3) foi realizada uma varredura dos peptídeos obtidos a partir de microarranjo proteico, avaliando a capacidade de reconhecimento específico por anticorpos presentes em 260 amostras de soros humanos, caracterizados em quatro grupos distintos: I – positivos para Zika, II – positivos para dengue, III – positivos para febre amarela, IV – negativos para as arboviroses testadas. Dentre os peptídeos testados, um peptídeo identificado na proteína do capsídeo de ZIKV apresentou resultados relevantes de reconhecimento específico e diferencial entre as amostras positivas para Zika e os outros grupos. Especialmente quando comparados os grupos positivos para Zikae dengue, este peptídeo foi eficiente em distinguir os grupos com sensiblidade de 100% e especificidade de 88,37%. Portanto, espera-se que este peptídeo possa ser utilizado no desenvolvimento de um teste diagnóstico sorológico diferencial e específico para Zika.The Zika virus (ZIKV), as well as Dengue virus (DENV) and Yellow Fever virus (YFV) are members of the Flaviviridae family, genus Flavivirus, and share high homology between their genomic sequences, increasing the possibility of immunological crossreactions between them and making it complex for the identification of epitopes and antibodies specific to Flaviviruses. ZIKV infection is related to serious neurological complications in newborns, such as microcephaly, and Guillan-Barret Syndrome in adults, which caused major public health problems in Brazil in 2015 and 2016. At the same time, were circulating in the country, transmitted by the same vectors, other arboviruses such as DENV, YFV and Chikungunya virus (CHIKV). Initially, the diseases caused by arboviruses have very similar symptoms, but when they worsen, they lead to different outcomes, which require different clinical management and hospital care. Therefore, it is important to develop an early differential diagnostic test that is sensitive and specific enough to identify these diseases early on. This work aims to identify specific regions of the ZIKV polyprotein that can be used as differential antigens in a diagnostic test for Zika. For this, the following methodology was designed: 1) using bioinformatics as a tool, a database was created for the study of specific and potentially differential antigenic epitopes between ZIKV, DENV and YFV; 2) antigenic and specific peptides of these flaviviruses were selected, designed and synthesized; 3) a scan of the peptides obtained from a protein microarray was performed, evaluating the ability of specific recognition by antibodies present in 260 samples of human sera, characterized in four distinct groups: I - positive for Zika, II - positive for dengue, III – positive for yellow fever, IV – negative for the arboviruses tested. Among the peptides tested, a peptide identified in the ZIKV capsid protein showed relevant results of specific and differential recognition between the Zika positive samples and the other groups. Especially when comparing the positive groups for Zika and dengue, this peptide was efficient in distinguishing the groups with sensitivity of 100% and specificity of 88.37%. Therefore, it is expected that this peptide can be used in the development of a differential and specific serological diagnostic test for Zika.CAPES FAPEMIG CNPqFundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.porZika virusDiagnóstico diferencialMicroarranjos proteicosZika virusDifferential diagnosisProtein MicroarrayflavivirusesZika vírus/imunologiaDiagnóstico diferencialMicroarranjos de proteínasIdentificação de Peptídeos para o Desenvolvimento de um Teste Diagnóstico Sorológico para Zikainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis2022Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Instituto Agge Magalhaes. Recife, PE, BrasilInstituto Adolph Lutz. São Paulo, SP, BrasilBelo Horizonte, MG, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúde. Belo Horizonte, MG, Brasilinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82991https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/55306/1/license.txt5a560609d32a3863062d77ff32785d58MD51ORIGINALT_2022_Stella Garcia Colombarolli.pdfT_2022_Stella Garcia Colombarolli.pdfapplication/pdf2623847https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/55306/2/T_2022_Stella%20Garcia%20Colombarolli.pdfd4085405078fe0bb757fb695ce17341eMD52icict/553062022-10-25 12:31:36.313oai:www.arca.fiocruz.br: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ório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352022-10-25T15:31:36Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false |
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