Toxoplasma gondii-célula muscular esquelética: aspectos estruturais e moleculares nos sistemas in vitro e in vivo

• Autor(a) principal: Gomes, Alessandra Ferreira
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/5660
• topic: Toxoplasma Gondii; Miogênese; Toxoplasma/induzido quimicamente; Toxoplasma/complicações; Fibras Musculares Esqueléticas /citologia; Caderinas/análise; Desenvolvimento Muscular/imunologia; Western Blotting /utilização; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/utilização

O Toxoplasma gondii parasito intracelular obrigatório tem como nicho durante a fase crônica da infecção, o músculo e o cérebro, o que justifica o emprego de culturas primárias de células musculares esqueléticas (CME) como modelo de estudo da toxoplasmose experimental. Os objetivos e resultados desta tese foram: (1) analisar a capacidade infectiva do T. gondii em CME durante a miogênese e seu efeito neste processo. Taquizoítos invadem 43% das células da cultura e mioblastos infectados inibem em 75% a formação de miotubos, afetando assim a miogênese. A expressão da molécula de adesão caderina foi modulada negativamente com diminuição expressiva do gene M-caderina em células infectadas; (2) Investigar o citoesqueleto em CME infectadas com T. gondii. A infecção de CME causou remodelamento de tubulina, desarranjo de filamentos de actina e reorganização de miosina. Testes por RT-PCR não mostraram significante mudança na síntese de mRNA para desmina durante a interação. Ensaios bioquímicos por Western blot mostraram uma redução da expressão da proteína desmina. O rompimento das barreiras físicas durante o escape do parasito da célula hospedeira garante novos ciclos celulares; (3) Correlacionar os dados experimentais das más formações congênitas observadas in vivo com o distúrbio da miogênese verificada in vitro. Análises histopatológicas apontram a interferência do T. gondii no desenvolvimento embrionário do tecido muscular revelando a formação de miofibras menores, com menos densidade de material citoplasmático e maior espaço intermiofibrilar; (4) Investigar a resposta celular de CME frente infecção pelo T. gondii. Nós demonstramos que a infecção leva a um aumento no número de corpúsculos lipídicos (CL), os CL interagem com o retículo sarcoplasmático e o citoesqueleto de actina. Por análise ultraestrutural foi visto que CL em contato direto com a membrana do vacúolo parasitóforo e dentro da matriz vacuolar, em torno e interagindo diretamente com a membrana do parasito, indicando que CL são recrutados e liberam seu conteúdo para dentro do PV. Houve um aumento nos níveis de mRNA da enzima ciclooxigenase-2 (COX- 2), nas primeiras horas de interação T.gondii-CME e um aumento na síntese de prostaglandina-E2 de 6 a 48 h de interação. Nós observamos um aumento na produção das citocinas interleucina-12 e interferon-γ em CME infectados. Nós sugerimos que o parasito modula a resposta celular de CME infectadas e deve contribuir para o erstabelecimento e manutenção na fase crônica da infecção na célula muscular.