Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2020 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/44938 |
Resumo: | As espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gatti representam patógenos fúngicos ambientais encapsulados que afetam não apenas indivíduos imunocomprometidos, mas também indivíduos aparentemente imunocompetentes. No Brasil, a criptococose permanece sendo uma das infecções fúngicas sistêmicas mais importantes. Em humanos, a fagocitose de Cryptococcus hipocapsular por macrófagos foi associada com longo prazo de sobrevida do paciente. Com base no papel fundamental da cápsula criptocócica na doença, analisamos a diversidade de estruturas capsulares em 23 isolados de excretas de pombos, coletados nos municípios de Boa Vista, Bonfim e Pacaraima, no estado de Roraima (Norte do Brasil). Todos os isolados foram identificados como C. neoformans (genótipo VNI) por espectrometria de massa MALDI-TOF. Através de uma combinação de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo, ELISA e métodos espectrofotométricos, cada isolado foi fenotipicamente caracterizado, o que incluiu medidas de taxas de crescimento a 30 e 37ºC, pigmentação, tamanho do corpo celular, dimensões capsulares, reatividade sorológica, produção de urease e capacidade de secreção de glucuronoxilomanana (GXM), o principal componente capsular de C. neoformans. Foi também avaliada a sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e AmB. Com exceção da melanização, uma grande diversidade foi observada considerando todos os parâmetros testados em nosso estudo. Vale ressaltar que isolados hiper e hipo produtores de GXM foram identificados, além de isolados com perfis de hiper e hiporreatividade com o anticorpo monoclonal reconhecedor do polissacarídeo As dimensões capsulares também foram altamente variáveis nos isolados analisados. A produção de GXM extracelular foi correlacionada positivamente com dimensões capsulares, atividade da urease e tamanho da célula. Inesperadamente, as concentrações de GXM não se correlacionaram com a reatividade sorológica com a cápsula criptocócica. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos revelaram alta sensibilidade dos isolados frente a AmB. Foram observados valores de susceptibilidade superiores para o fluconazol (8.0 \03BCg/mL) em dois isolados (151A1 e 176A1) em comparação com a cepa padrão H99 / ATCC 208821 (2.0 \03BCg/mL). Estes resultados revelam uma alta diversidade na capacidade de C. neoformans ambientais em produzir componentes capsulares, o que pode afetar o curso da criptococose humana. |
id |
CRUZ_2490af275bf99e629a2b23c219023581 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:www.arca.fiocruz.br:icict/44938 |
network_acronym_str |
CRUZ |
network_name_str |
Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
repository_id_str |
2135 |
spelling |
Dal Pupo, Halan DenyRodrigues, Márcio Lourenço2020-12-16T17:06:06Z2020-12-16T17:06:06Z2020DAL PUPO, Halan Deny. Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil. 2020. 90 f. Tese (Doutorado em Biologia Parasitária) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2020.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/44938As espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gatti representam patógenos fúngicos ambientais encapsulados que afetam não apenas indivíduos imunocomprometidos, mas também indivíduos aparentemente imunocompetentes. No Brasil, a criptococose permanece sendo uma das infecções fúngicas sistêmicas mais importantes. Em humanos, a fagocitose de Cryptococcus hipocapsular por macrófagos foi associada com longo prazo de sobrevida do paciente. Com base no papel fundamental da cápsula criptocócica na doença, analisamos a diversidade de estruturas capsulares em 23 isolados de excretas de pombos, coletados nos municípios de Boa Vista, Bonfim e Pacaraima, no estado de Roraima (Norte do Brasil). Todos os isolados foram identificados como C. neoformans (genótipo VNI) por espectrometria de massa MALDI-TOF. Através de uma combinação de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo, ELISA e métodos espectrofotométricos, cada isolado foi fenotipicamente caracterizado, o que incluiu medidas de taxas de crescimento a 30 e 37ºC, pigmentação, tamanho do corpo celular, dimensões capsulares, reatividade sorológica, produção de urease e capacidade de secreção de glucuronoxilomanana (GXM), o principal componente capsular de C. neoformans. Foi também avaliada a sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e AmB. Com exceção da melanização, uma grande diversidade foi observada considerando todos os parâmetros testados em nosso estudo. Vale ressaltar que isolados hiper e hipo produtores de GXM foram identificados, além de isolados com perfis de hiper e hiporreatividade com o anticorpo monoclonal reconhecedor do polissacarídeo As dimensões capsulares também foram altamente variáveis nos isolados analisados. A produção de GXM extracelular foi correlacionada positivamente com dimensões capsulares, atividade da urease e tamanho da célula. Inesperadamente, as concentrações de GXM não se correlacionaram com a reatividade sorológica com a cápsula criptocócica. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos revelaram alta sensibilidade dos isolados frente a AmB. Foram observados valores de susceptibilidade superiores para o fluconazol (8.0 \03BCg/mL) em dois isolados (151A1 e 176A1) em comparação com a cepa padrão H99 / ATCC 208821 (2.0 \03BCg/mL). Estes resultados revelam uma alta diversidade na capacidade de C. neoformans ambientais em produzir componentes capsulares, o que pode afetar o curso da criptococose humana.The species Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gatti represent encapsulated environmental fungal pathogens that affect not only immunocompromised individuals, but also apparently immunocompetent individuals. In Brazil, cryptococcosis remains one of the most important systemic fungal infections. In humans, the macrophage hypocapsular Cryptococcus phagocytosis was associated with long-term patient survival. Based on the fundamental role of the cryptococcal capsule in the disease, we analyzed the diversity of capsular structures in 23 isolates of pigeon excreta, collected in the municipalities of Boa Vista, Bonfim and Pacaraima, in the state of Roraima (Northern Brazil). All isolates were identified as C. neoformans (VNI genotype) by MALDI-TOF mass spectrometry. Through a combination of fluorescence microscopy, flow cytometry, ELISA and spectrophotometric methods, each isolate was characterized at the phenotypic level, which included measures of growth rates at 30 and 37ºC, pigmentation, cell body size, capsular dimensions, serological reactivity, urease production and secretion capacity of extracellular glucuronoxylomannan (GXM), the main capsular component of C. neoformans. The sensitivity to fluconazole and AmB antifungals was also assessed. With the exception of melanization, a great diversity was observed considering all the parameters tested in our study. It is noteworthy that hyper and hypo GXM-producing isolates were identified, in addition to isolates with hyper and hyporeactivity profiles with the polysaccharide-recognizing monoclonal antibody Capsular dimensions were also highly variable in the analyzed isolates. The production of extracellular GXM was positively correlated with capsular dimensions, urease activity and cell size. Unexpectedly, the GXM concentrations did not correlate with the serological reactivity with the cryptococcal capsule. The sensitivity tests to antifungals revealed high sensitivity of the isolates to AmB. Higher susceptibility values for fluconazole (8.0 \03BCg / mL) were observed in two isolates (151A1 and 176A1) compared to the standard H99 / ATCC 208821 strain (2.0 \03BCg / mL). These results reveal a high diversity in the capacity of environmental C. neoformans to produce capsular components, which can affect the course of human cryptococcosis.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.porCryptococcus neoformansFarmacorresistência FúngicaSensibilidade colateral a medicamentosCryptococcus neoformansFarmacorresistência FúngicaSensibilidade colateral a medicamentosAnálise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasilinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis2020Instituto Oswaldo CruzFundação Oswaldo CruzRio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Biologia Parasitáriainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALhalan_pupo_ioc_dout_2020.pdfapplication/pdf2429119https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/2/halan_pupo_ioc_dout_2020.pdf2c88a842a9df9d77f93e975c4461fa87MD52TEXThalan_pupo_ioc_dout_2020.pdf.txthalan_pupo_ioc_dout_2020.pdf.txtExtracted texttext/plain172450https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/3/halan_pupo_ioc_dout_2020.pdf.txtbb7eda79c997e7cdae7c8793d8d10bdeMD53icict/449382022-06-24 13:02:55.057oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352022-06-24T16:02:55Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false |
dc.title.pt_BR.fl_str_mv |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
title |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
spellingShingle |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil Dal Pupo, Halan Deny Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos |
title_short |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
title_full |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
title_fullStr |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
title_full_unstemmed |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
title_sort |
Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil |
author |
Dal Pupo, Halan Deny |
author_facet |
Dal Pupo, Halan Deny |
author_role |
author |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Dal Pupo, Halan Deny |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Rodrigues, Márcio Lourenço |
contributor_str_mv |
Rodrigues, Márcio Lourenço |
dc.subject.other.pt_BR.fl_str_mv |
Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos |
topic |
Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos |
dc.subject.decs.pt_BR.fl_str_mv |
Cryptococcus neoformans Farmacorresistência Fúngica Sensibilidade colateral a medicamentos |
description |
As espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gatti representam patógenos fúngicos ambientais encapsulados que afetam não apenas indivíduos imunocomprometidos, mas também indivíduos aparentemente imunocompetentes. No Brasil, a criptococose permanece sendo uma das infecções fúngicas sistêmicas mais importantes. Em humanos, a fagocitose de Cryptococcus hipocapsular por macrófagos foi associada com longo prazo de sobrevida do paciente. Com base no papel fundamental da cápsula criptocócica na doença, analisamos a diversidade de estruturas capsulares em 23 isolados de excretas de pombos, coletados nos municípios de Boa Vista, Bonfim e Pacaraima, no estado de Roraima (Norte do Brasil). Todos os isolados foram identificados como C. neoformans (genótipo VNI) por espectrometria de massa MALDI-TOF. Através de uma combinação de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo, ELISA e métodos espectrofotométricos, cada isolado foi fenotipicamente caracterizado, o que incluiu medidas de taxas de crescimento a 30 e 37ºC, pigmentação, tamanho do corpo celular, dimensões capsulares, reatividade sorológica, produção de urease e capacidade de secreção de glucuronoxilomanana (GXM), o principal componente capsular de C. neoformans. Foi também avaliada a sensibilidade aos antifúngicos fluconazol e AmB. Com exceção da melanização, uma grande diversidade foi observada considerando todos os parâmetros testados em nosso estudo. Vale ressaltar que isolados hiper e hipo produtores de GXM foram identificados, além de isolados com perfis de hiper e hiporreatividade com o anticorpo monoclonal reconhecedor do polissacarídeo As dimensões capsulares também foram altamente variáveis nos isolados analisados. A produção de GXM extracelular foi correlacionada positivamente com dimensões capsulares, atividade da urease e tamanho da célula. Inesperadamente, as concentrações de GXM não se correlacionaram com a reatividade sorológica com a cápsula criptocócica. Os testes de sensibilidade aos antifúngicos revelaram alta sensibilidade dos isolados frente a AmB. Foram observados valores de susceptibilidade superiores para o fluconazol (8.0 \03BCg/mL) em dois isolados (151A1 e 176A1) em comparação com a cepa padrão H99 / ATCC 208821 (2.0 \03BCg/mL). Estes resultados revelam uma alta diversidade na capacidade de C. neoformans ambientais em produzir componentes capsulares, o que pode afetar o curso da criptococose humana. |
publishDate |
2020 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2020-12-16T17:06:06Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2020-12-16T17:06:06Z |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2020 |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
format |
doctoralThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
DAL PUPO, Halan Deny. Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil. 2020. 90 f. Tese (Doutorado em Biologia Parasitária) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2020. |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/44938 |
identifier_str_mv |
DAL PUPO, Halan Deny. Análise fenotípica de isolados de Cryptococcus neoformans coletados no estado de Roraima, norte do Brasil. 2020. 90 f. Tese (Doutorado em Biologia Parasitária) - Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2020. |
url |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/44938 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) instacron:FIOCRUZ |
instname_str |
Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) |
instacron_str |
FIOCRUZ |
institution |
FIOCRUZ |
reponame_str |
Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
collection |
Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/1/license.txt https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/2/halan_pupo_ioc_dout_2020.pdf https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/44938/3/halan_pupo_ioc_dout_2020.pdf.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 2c88a842a9df9d77f93e975c4461fa87 bb7eda79c997e7cdae7c8793d8d10bde |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) |
repository.mail.fl_str_mv |
repositorio.arca@fiocruz.br |
_version_ |
1798324720128491520 |