Investigação do efeito citotóxico do extrato metanólico de Bixa orellana L sobre células astrocíticas tumorais e astrócitos in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Freitas, Vanessa Santana
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/4320
Resumo: Investigar a capacidade antitumoral do extrato metanólico de Bixa orellana em células neoplásicas de Glioblastoma multiforme (GL-15) e Glioma murino (C6), sem toxicidadade para as células astrocitárias normais in vitro. Métodos e resultados: Caracterização do extrato por espectrofotometria por absorção de luz visível apresentou picos em 286, 363 e 435 nm. Determinou-se os teores de bixina e compostos fenólicos – 0,17 mg/mg e 0,05 mg por equivalência de pirogalol/mg de extrato seco, respectivamente. A citoxicidade foi investigada pelo teste de Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium. A Mínima Concentração Citotóxica (MCC) para GL-15 foi 180 e 80 μg/mL para C6, para astrócitos foi 240 μg/mL, após 48 horas de tratamento. O teste de exclusão com azul tripan confirmou a EC50 para GL-15 após 24 horas. A análise morfológica foi realizada por microscopia de contrataste de fase e fluorescência. Comprovou-se a diminuição de células neoplásicas e alterações celulares na MCC em astrócitos. A capacidade de fluorescência foi comprovada em GL-15. A citotoxicidade não depletou GSH. Investigou-se alterações de ciclo celular e morte celular por citometria de fluxo. Alterações de ciclo celular não foram evidenciadas. O tipo de morte celular foi investigado com marcação para anexina V e Iodeto de Propídio comprovou morte por necrose em GL-15 e por apoptose tardia em C6, os astrócitos apresentaram valores pequenos de morte por apoptose tardia e necrose. Conclusão: Os dados indicam um potencial antitumoral das substâncias presentes neste extrato para células neoplásicas sem ser tóxico para células normais.
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A citoxicidade foi investigada pelo teste de Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium. A Mínima Concentração Citotóxica (MCC) para GL-15 foi 180 e 80 μg/mL para C6, para astrócitos foi 240 μg/mL, após 48 horas de tratamento. O teste de exclusão com azul tripan confirmou a EC50 para GL-15 após 24 horas. A análise morfológica foi realizada por microscopia de contrataste de fase e fluorescência. Comprovou-se a diminuição de células neoplásicas e alterações celulares na MCC em astrócitos. A capacidade de fluorescência foi comprovada em GL-15. A citotoxicidade não depletou GSH. Investigou-se alterações de ciclo celular e morte celular por citometria de fluxo. Alterações de ciclo celular não foram evidenciadas. O tipo de morte celular foi investigado com marcação para anexina V e Iodeto de Propídio comprovou morte por necrose em GL-15 e por apoptose tardia em C6, os astrócitos apresentaram valores pequenos de morte por apoptose tardia e necrose. Conclusão: Os dados indicam um potencial antitumoral das substâncias presentes neste extrato para células neoplásicas sem ser tóxico para células normais.This work investigated the hypothesis that the methanol extract of Bixa orellana decreases the viability of GL-15 and C6 cells, without being toxic to normal astrocytes in vitro. Methods: The methanol extract of B. orellana seeds was obtained and characterized by UV-Vis spectrophotometry. The cytotoxic effects were assayed in vitro using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide method. The cell morphology was investigated by phase contrast and fluorescence microscopy. The depletion of reduced glutathione (GSH) was observed by fluorescence microscopy. The effects on cell cycle and the mode of cell death was studied by flow cytometry. Results: The contents of bixin and phenol were 0.17 mg/mg of extract and 0.05 mg of pyrogallol equivalent/mg of extract, respectively. Three peaks were observed at 286, 363, and 435 nm. The extract killed cells in a dose-dependent manner. The minimum cytotoxic concentrations in the two tumoral cells (GL-15 and C6) were respectively: 180 μg/mL and 80 μg/mL, meanwhile in astrocytes it was 240 μg/mL after 48 hours. The trypan blue assay confirmed the cytotoxic effect to GL-15 cells. Morphological degeneration of treated glioma cells was observed. The same was observed with astrocytes, but at a higher concentration. Treated cells became fluorescent, probably due to incorporation of bixin. The treatment neither depleted GSH, nor interfered on the cell cycle. The main kind of cell death was necrosis. Conclusions: Compounds present in B. orellana seeds are potentially cytotoxic to glioma cells, meanwhile primary astrocytes are more resistant.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilporBixa orellanaGlioblastomaNecroseCitotoxicidadeBixa orellanaGlioblastomaNecrosisCytotoxicityInvestigação do efeito citotóxico do extrato metanólico de Bixa orellana L sobre células astrocíticas tumorais e astrócitos in vitroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2011Centro de Pesquisas Gonçalo MonizFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo MonizSalvadorPós-Graduação em Patologia Humanainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZORIGINALVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdfVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdfapplication/pdf1637760https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4320/1/Vanessa%20Investigacao%20do%20efeito%20citit%c3%b3xico....pdf53a0a5f0c495bc04a29d54e8f4415870MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82008https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4320/2/license.txt06db3f0df647fd9ddff657403bbe0ee2MD52TEXTVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf.txtVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf.txtExtracted texttext/plain101610https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4320/5/Vanessa%20Investigacao%20do%20efeito%20citit%c3%b3xico....pdf.txt48aaee83de75d1f4593e30daaad715f2MD55THUMBNAILVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf.jpgVanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1540https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/4320/4/Vanessa%20Investigacao%20do%20efeito%20citit%c3%b3xico....pdf.jpg51118c8a9582af5f3033bf7257107007MD54icict/43202018-05-22 15:54:55.774oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352018-05-22T18:54:55Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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