Avaliação do perfil fenotípico e genotípico de isolados clínicos de Histoplasma capsulatum no Ceará, e sua relação com os aspectos clínico-epidemiológicos

• Autor(a) principal: Damasceno, Lisandra Serra
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/26521
• topic: Histoplasmose; Histoplasma; Variação Genética; Fenotipo; Tipagem de sequências Multilocus

Histoplasma capsulatum, agente da histoplasmose clássica, é encontrado com grande frequência em toda América. Diferenças genéticas previamente observadas entre H. capsulatum isolados de diferentes regiões geográficas do mundo permitiram especular que genótipos distintos estão associados com as formas clínicas da enfermidade. O objetivo deste estudo foi caracterizar a variabilidade fenotípica e genética de isolados de H.capsulatum do Ceará, e avaliar a relação destas características com os aspectos clínico-epidemiológicos dos casos de histoplasmose diagnosticados no Hospital São José de Doenças Infecciosas (HSJ), Ceará, no período de 2011-2014. Dados clínicos e epidemiológicos foram obtidos através da revisão de prontuários médicos no HSJ. A realização dos testes fenotípicos e estudos moleculares foram conduzidos no Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas, da Fundação Oswaldo Cruz (INI/Fiocruz) e Universidade Autônoma do México (UNAM). Características fenotípicas dos isolados fúngicos foram identificadas após 21 dias de cultivo no meio Agar Batata Glicosado, sendo descritos aspectos relativos à macro (textura, pigmentação) e micromorfologia. Teste de conversão dimórfica foi realizado no meio ML- Gema. Teste de exoantígenos foi avaliado através de imunodifusão radial dupla e Western Blot (WB). Estudos moleculares foram realizados através de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando os seguintes marcadores moleculares: lócus MAT1, região ITS, microsatélite (GA)n e sequenciamento multilocus (MLST) de quatro genes nucleares (arf, H- anti, ole1, e tub1) em todos os isolados fúngicos Análises estatísticas foram realizadas no STATA 11.2, e análises filogenéticas através de diversos softwares (MEGA 6, PAUP, Phylm). Durante o período do estudo, um total de 43 hospitalizações ocorreram em 40 pacientes, sendo identificados 51 isolados fúngicos. A maioria das colônias apresentou pigmentação branca e branco-bege (70,6%), e tinham textura cotonosa (82%). A presença de todas as estruturas de esporulação nas colônias filamentosas foi observada em 74,5% dos isolados. Conversão dimórfica ocorreu em 98% das cepas. Ambos os antígenos H e M foram identificados em 54,9% dos isolados através de WB. Dentre os 51 isolados fúngicos estudados, 53% eram MAT1-2, e 47% MAT1-1. Colônias pulverulentas foram associadas com a presença de manifestações hemorrágicas nos pacientes, e colônias de pigmentação branca e branco-bege foram relacionadas à insuficiência renal aguda. Óbito foi associado com a presença de isolados que continham todas as estruturas de esporulação. Análise filogenética identificou uma população genética restrita ao Ceará/Brasil. Além disso, observaram-se ainda quatro haplótipos diferentes ao grupo de isolados do Ceará, sendo dois haplótipos descritos pela primeira vez no mundo. Através de análise de MLST foi possível confirmar a presença de uma nova população genética de H. capsulatum circulante no Ceará, com dois subgrupos genéticos diferentes entre os isolados fúngicos, com significante taxa de recombinação genética. Diferentes fenótipos, e genótipos, incluindo a presença de MAT1-2, que ainda não havia sido identificado no Brasil, foram observados neste estudo. Além disso, isolados de H. capsulatum procedentes do Ceará constituíram um novo grupo genético, com diferentes subpopulações.