Investigação de hepatite B oculta e de torque teno vírus em pacientes com hepatite C crônica com e sem carcinoma hepatocelular

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rosa, Agatha Gabriella da Silva
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/22933
Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) é o sexto câncer mais comum em todo o mundo e a segunda principal causa de mortalidade relacionada ao câncer. Devido ao curto tempo de evolução, o tumor é geralmente detectado em um estágio avançado, aumentando a taxa de mortalidade deste câncer. Vários estudos têm sugerido que o desenvolvimento do CHC é um processo influenciado por fatores herdados e adquiridos. Os principais fatores etiológicos para o desenvolvimento do CHC são as infecções crônicas causadas pelo vírus da hepatite B (HBV) e da hepatite C (HCV), alcoolismo e fatores relacionados ao metabolismo e imunidade do paciente, os quais podem atuar isoladamente ou sinergicamente, acelerando, portanto, o dano hepático. Ademais, além do HBV e HCV, sabe-se que outros vírus hepatotrópicos desenvolvem infecções crônicas. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o viroma presente no soro de pacientes com e sem CHC, bem como investigar a ocorrência da infecção oculta pelo HBV e a diversidade genética do Torque teno vírus (TTV) em pacientes cronicamente infectados pelo HCV. Para a identificação do viroma circulante, amostras de soro de 37 pacientes foram selecionadas e agrupadas em 12 grupos distintos de acordo com a etiologia e o estágio da doença hepática. Os ácidos nucleicos extraídos foram submetidos a um processo de amplificação randômica, e as bibliotecas genômicas foram obtidas para posterior sequenciamento de nova geração (NGS) com abordagem metagenômica. Após a análise das sequências de NGS verificamos que nenhuma sequência viral foi recuperada a partir das bibliotecas genômicas. Além disso, um total de 151 pacientes com infecção crônica pelo HCV foi selecionado para a investigação de infecção oculta pelo HBV e de infecção pelo TTV A ocorrência de HBV oculto foi investigada por um ensaio de PCR em semi-nested tendo como alvo o gene S do HBV. A diversidade genética do TTV foi analisada por uma PCR multiplex que identifica simultaneamente todos os cinco genogrupos virais. Entre os 151 pacientes com infecção crônica pelo HCV incluídos neste estudo, cinco (3,3%) apresentaram infecção oculta pelo HBV. Todos os cinco pacientes foram diagnosticados com CHC (p=0,003). Os genótipos de HBV encontrados foram A1 (em três pacientes), e A2 e D3 (em um paciente, cada). A prevalência de TTV encontrada no grupo de estudo foi de 45%. A infecção pelo TTV foi significativamente mais frequente em pacientes com CHC do que nos pacientes sem o câncer (p=0,006). Todos os cinco genogrupos de TTV foram encontrados com frequências semelhantes em pacientes com e sem CHC. O genogrupo 3 foi o mais prevalente (45% e 28%), enquanto o genogrupo 2 foi o menos frequente (0 e 1%), em pacientes com e sem CHC, respectivamente. O resultado da análise metagenômica pode ter sido devido à ocorrência de uma possível contaminação bacteriana durante os experimentos. A presença de hepatite B oculta apenas nos pacientes com CHC sugere um fator associado ao desenvolvimento deste câncer em paciente cronicamente infectados pelo HCV. Nenhuma diferença significativa na prevalência dos genogrupos de TTV nos pacientes com e sem CHC foi encontrada. Ademais, a imunossupressão de pacientes com CHC pode ter sido o fator responsável pela maior frequência de coinfecções nestes pacientes.
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Os principais fatores etiológicos para o desenvolvimento do CHC são as infecções crônicas causadas pelo vírus da hepatite B (HBV) e da hepatite C (HCV), alcoolismo e fatores relacionados ao metabolismo e imunidade do paciente, os quais podem atuar isoladamente ou sinergicamente, acelerando, portanto, o dano hepático. Ademais, além do HBV e HCV, sabe-se que outros vírus hepatotrópicos desenvolvem infecções crônicas. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o viroma presente no soro de pacientes com e sem CHC, bem como investigar a ocorrência da infecção oculta pelo HBV e a diversidade genética do Torque teno vírus (TTV) em pacientes cronicamente infectados pelo HCV. Para a identificação do viroma circulante, amostras de soro de 37 pacientes foram selecionadas e agrupadas em 12 grupos distintos de acordo com a etiologia e o estágio da doença hepática. Os ácidos nucleicos extraídos foram submetidos a um processo de amplificação randômica, e as bibliotecas genômicas foram obtidas para posterior sequenciamento de nova geração (NGS) com abordagem metagenômica. Após a análise das sequências de NGS verificamos que nenhuma sequência viral foi recuperada a partir das bibliotecas genômicas. Além disso, um total de 151 pacientes com infecção crônica pelo HCV foi selecionado para a investigação de infecção oculta pelo HBV e de infecção pelo TTV A ocorrência de HBV oculto foi investigada por um ensaio de PCR em semi-nested tendo como alvo o gene S do HBV. A diversidade genética do TTV foi analisada por uma PCR multiplex que identifica simultaneamente todos os cinco genogrupos virais. Entre os 151 pacientes com infecção crônica pelo HCV incluídos neste estudo, cinco (3,3%) apresentaram infecção oculta pelo HBV. Todos os cinco pacientes foram diagnosticados com CHC (p=0,003). Os genótipos de HBV encontrados foram A1 (em três pacientes), e A2 e D3 (em um paciente, cada). A prevalência de TTV encontrada no grupo de estudo foi de 45%. A infecção pelo TTV foi significativamente mais frequente em pacientes com CHC do que nos pacientes sem o câncer (p=0,006). Todos os cinco genogrupos de TTV foram encontrados com frequências semelhantes em pacientes com e sem CHC. O genogrupo 3 foi o mais prevalente (45% e 28%), enquanto o genogrupo 2 foi o menos frequente (0 e 1%), em pacientes com e sem CHC, respectivamente. O resultado da análise metagenômica pode ter sido devido à ocorrência de uma possível contaminação bacteriana durante os experimentos. A presença de hepatite B oculta apenas nos pacientes com CHC sugere um fator associado ao desenvolvimento deste câncer em paciente cronicamente infectados pelo HCV. Nenhuma diferença significativa na prevalência dos genogrupos de TTV nos pacientes com e sem CHC foi encontrada. Ademais, a imunossupressão de pacientes com CHC pode ter sido o fator responsável pela maior frequência de coinfecções nestes pacientes.The hepatocellular carcinoma (HCC) is the sixth most common cancer worldwide and the second leading cause of cancer mortality. Due to the short time of evolution, the tumor is usually detected on an advanced stage, increasing the rate of mortality of this cancer. Several studies have suggested that HCC development is a process affected by inherited and acquired factors. The main etiological factors for HCC development are the hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) chronic infections, alcoholism, and factors related to patient\2019s metabolism and immunity, which can act isolated or synergistically, accelerating, thus, the damage of the liver. Also, besides the traditionally known HBV and HCV, other hepatotropic viruses are described to develop chronic infections.Thus, the goal of this study was to analyze the virome of patients with and without HCC, as well as, to investigate the occurrence of occult HBV and Torque teno virus (TTV) infections in patients chronically infected with HCV. For the identification of the circulating virome, serum samples from 37 patients were selected and grouped into 12 distinct groups according to the etiology and stage of liver disease. The extracted nucleic acids were submitted to a random amplification process, and the genomic libraries were obtained to after next generation sequencing (NGS) with metagenomic approach. After the analysis of the NGS sequences we verified that no viral sequence was recovered from the genomic libraries constructed. In addition, a total of 151 patients with HCV chronic infection were selected for the investigation of occult HBV and TTV infections. The occurrence of occult HBV infection was investigated by a semi-nested PCR assay targeting the S gene. The genetic diversity of TTV was analyzed by a multiplex PCR that identifies simultaneously all five genogroups Among the 151 patients with chronic HCV infection included in this study, five (3,3%) were found to be positive for occult HBV infection. All five patients were diagnosed with HCC (p=0.003). HBV genotypes were A1 (in three patients), and A2 and D3 (in one patient, each). The TTV prevalence found in the study group was 45%. TTV infection was significantly more frequent in patients with HCC than without (p=0.006). Moreover, all five TTV genogroups werefound with similar frequencies in patients with and without HCC. Genogroup 3 was the most prevalent (45% and 28%), while genogroup 2 was the less frequent (0 and 1%), in patients with and without HCC, respectively. The metagenomic analysis result could be due to a possible bacterial contamination during the experiments. The presence of occult hepatitis B only in patients with HCC suggests a factor associated with the development of this cancer in chronically HCV-infected patients. No significant difference in the genogroup prevalence of TTV in patients with and without CHC was found. Furthermore, the immunosuppression of patients with HCC may have been the factor responsible for the higher frequency of co-infections in these patients.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, BrasilporVirologiaHepatite BHepatite C crônicaTorque teno vírusCarcinoma hepatocelularVirologiaHepatite BHepatite C crônicaTorque teno vírusCarcinoma hepatocelularInvestigação de hepatite B oculta e de torque teno vírus em pacientes com hepatite C crônica com e sem carcinoma hepatocelularinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2017Pós-Graduação em Biologia ParasitáriaFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo CruzMestrado AcadêmicoRio de Janeiro/RJPrograma de Pós-Graduação em Biologia Parasitáriainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22933/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALagatha_rosa_ioc_mest_2017.pdfagatha_rosa_ioc_mest_2017.pdfapplication/pdf2926861https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22933/2/agatha_rosa_ioc_mest_2017.pdf397229ccf2012ca160491baf4adf56abMD52TEXTagatha_rosa_ioc_mest_2017.pdf.txtagatha_rosa_ioc_mest_2017.pdf.txtExtracted texttext/plain224936https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22933/3/agatha_rosa_ioc_mest_2017.pdf.txt69d26cf957d579d4cfb66058958e5de6MD53icict/229332019-09-09 16:38:47.309oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352019-09-09T19:38:47Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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