Resposta fibrogênica de fibroblastos e prospecção de alvos terapêuticos contra a fibrose cardíaca na Doença de Chagas

• Autor(a) principal: Silva, Tatiana Araújo
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55373
• topic: Citocinas; Fibrose; Vias de sinalização; Cardiomiopatia; Cytokines; Fibrosis; Signaling Pathway; Cardiomyopathy; Fibrose Endomiocárdica; Cardiomiopatia Chagásica; Citocinas; Fibroblastos

Componentes da matriz extracelular (MEC) acumulam-se no tecido cardíaco durante a doença de Chagas (DC), levando à fibrose. Evidências clínicas revelaram uma correlação do nível de fibrose com o comprometimento do desempenho cardíaco. A redução da carga parasitária durante a fase crônica não melhora o desfecho clínico em pacientes cardíacos, o que sugere que o desenvolvimento de terapias para recuperação da fibrose é necessário em combinação com agentes tripanocidas para promover melhora clínica quando a cardiomiopatia está avançada. Os objetivos do nosso estudo são: i) avaliar a participação de TGF-, TNF-α e IFN- na regulação da expressão de componentes de MEC em culturas de fibroblastos cardíacos (FC) normais e infectadas com T. cruzi; ii) analisar vias de sinalização que participam no processo de remodelamento tecidual; iii) identificar inibidores do acúmulo de colágeno induzida pelo T. cruzi no coração através da triagem de compostos anti-fibrose em culturas de fibroblastos cardíacos humanos (FCh). Nossos dados revelaram um aumento na expressão de fibronectina e colágeno na MEC em FC normais e infectados com T. cruzi, após o estímulo com TGF-, TNF-α e IFN-. O estímulo na expressão de fibronectina e colágeno ocorreu junto com disparo nas vias de sinalização de c-Jun e p38 após infecção pelo T. cruzi e tratamento com citocinas, enquando houve uma redução de Smad 2 fosforilada após tratamento com TGF- em culturas infectadas. Ainda, em culturas de FC infectadas e estimuladas com citocinas proinflamatórias, foi observado um aumento na fosforilação de p38 MAPK e c-Jun. Para estabelecer ensaios de triagem de compostos anti-fibrose, utilizamos o corante Sirius Red/Fast green como leitura para quantificar tanto a expressão do colágeno e a quantidade de proteínas totais, avaliando a citotoxicidade. Analisamos o efeito de inibidores de TGF- (pirfenidona) e de vias de sinalização da família MAPK, p38 (losmapimod) e c-Jun (SP600125), assim como análogos de glicosaminoglicanos (GAG’s) na modulação da infecção e da deposição de colágeno na MEC em FCh.Em culturas de FCh, a infecção por T. cruzi e soro de camundongos infectados acarretam em um aumento significativo na expressão de colágeno. Identificamos um efeito antifibrótico para Pirfenidona (inibidor de TGF-β e TNF-α, IC50 114,3 μM), Losmapimod (inibidor p38, IC50 17,6 μM) e SP600125 (inibidor c-Jun, IC50 3,9 μM). Este efeito é independente da proliferação da FC, uma vez que estes compostos não afetam a multiplicação da célula hospedeira induzida pelo T. cruzi medida pela incorporação de BrdU. Os derivados da heparina foram capazes de inibir o acúmulo de colágeno por um duplo efeito na proliferação da FC e na redução da carga parasitária. Ensaios in vivo de infecção crônica com T. cruzi mostraram redução de colágeno no coração por pirfenidona. Estes resultados propõem uma nova abordagem para a terapia de fibrose em DC, com a perspectiva de possíveis novos tratamentos para reduzir a síntese excessiva de proteínas da MEC durante a infecção por T. cruzi