Caracterização parcial de uma ATPase de citosol de encéfalo de rato

• Autor(a) principal: Piniheiro, Carla Mônica
• Data de Publicação: 2001
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60712
• topic: Proteínas; Adenosinatrifosfatase; Purificação; Inibidores enzimáticos

Os resultados deste trabalho mostram a obtenção- de uma fração enriquecida em atividade ATPásica a partir de citosol de encéfalo de rato O homogeneizado de encéfalos foi centrifugado a 50 000 x g durante 40 minutos e o sobrenadante aplicado a resina de SP-Sepharose. A fração que não interagiu com a resina foi tratada com sulfato de amônio e aplicada a coluna de Q-Sepharose. A fração que não interagiu com esta resina apresentou alta atividade ATPásica; foi tratada com sulfato de amônio 30% e a atividade recuperada por centrifugação. A fração obtida apresentou atividade Mg2t-ATPásica, mas a atividade Ca2‘-ATPásica foi nula. Não foi detectada atividade KVEDTA-ATPásica. Sua atividade Mg--ATPásica foi bem maior que a atividade GTPásica; ADP e PPí não foram substratos. Fluoreto de alumínio mostrou inibição de 30% sobre a53 .. .í atividade ATPásica. Vanadato e azida não tiveram efeito considerável ; sobre a atividade. Triton X-100 0.2% e alta força iônica inibiram a atividade em torno de 60%. Em SDS-PAGE observou-se a presença de dois polipeptídeos principais de 160 e 54 kDa. A ATPase não interagiu com colunas de troca iônica e sua atividade apresentou propriedades distintas de ATPases conhecidas como Ca2 -ATPase, F^o-ATPase, Na7Kh-ATPase, miosinas, cinesinas e dineínas.