Investigação de diversos biomarcadores em uma linhagem celular diferenciada em macrófagos para o desenvolvimento de um ensaio de potência alternativa para vacina atenuada contra dengue

• Autor(a) principal: Souza, Nathalia Rocha Quintino
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/40035
• topic: THP-1; Macrófagos; Polarização; Dengue; THP-1; Macrophage; Polarization; Dengue; Ativação de Macrófagos; Dengue; Polarização de Fluorescência

Neste presente trabalho buscamos investigar biomarcadores em uma linhagem celular diferenciada em macrófagos para um modelo in vitro de infecção pelo vírus Dengue 2 (DENV-2) com a finalidade de desenvolver um método alternativo para avaliar a potência de vacinas de vírus atenuados, como a vacina da dengue. Para tal, utilizamos a linhagem celular monocítica THP-1, diferenciada em macrófagos (moTHP-1), que foram infectados com DENV-2, além da vacina comercial atenuada Dengvaxia®, que contém os quatro sorotipos da Dengue. As moTHP-1 foram estimuladas com IFN-y/LPS e IL-4/IL-13 para polarização nos perfis de macrófagos clássico (M1) e alternativo (M2), respectivamente. Além disso, moTHP-1 não estimuladas foram infectadas com diferentes diluições tanto com o DENV-2 quanto com a vacina comercial contra a Dengue. Para avaliar os perfis M1 e M2 usamos os marcadores de superfície CD86 e TLR2, além de medir a concentração de Óxido Nítrico (NO), através da dosagem de nitrito. Observamos que as células diferenciadas para o perfil M2 apresentaram uma menor mediana de intensidade de fluorescência (M.I.F.) de TLR2 quando comparadas com o perfil M1. As moTHP-1 infectadas com o vírus DENV-2 ou com a vacina apresentaram alteração nas moléculas de superfície (CD86 e TLR2) utilizadas, indicando que tanto o vírus quanto a vacina foram capazes de modular esses receptores, quando comparadas com as moTHP-1 estimuladas com IFN-γ/LPS ou IL-4/IL-13. Observamos que as moTHP-1 infectadas com o vírus DENV-2 ou com a vacina apresentaram diferenças na expressão dos efetores antivirais investigados neste trabalho (OAS1-3, RNase L, MxA e EIF2αK2). Verificamos também a possibilidade dessas proteínas (OAS1-3, RNase L, MxA e EIF2αK2) e dos receptores de superfície (TLR2 e CD86) serem usados como biomarcadores para um ensaio de potência alternativo para vacinas de vírus atenuados e apontamos o TLR2 como possível candidato, pois este apresentou o melhor padrão de linearidade.