Improved replication of the baculovirus Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) in vitro using proteins from Lonomia obliqua hemolymph
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Data de Publicação: | 2015 |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37882 |
Resumo: | O baculovírus Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV), um membro da família Baculoviridae, tem sido amplamente aplicado como biopesticida para o controle da lagarta de veludo, uma praga do campo de cultivo de soja. Os baculovírus são considerados agentes seguros e eficientes para esse fim, pois não infectam vertebrados, sendo seguros para a saúde de humanos e animais, bem como para o meio ambiente. O objetivo deste trabalho foi identificar proteínas obtidas da hemolinfa de Lonomia obliqua com potencial aplicação na otimização da replicação do baculovírus AgMNPV em cultura de células de inseto Sf9. Neste trabalho, a melhoria da cultura celular e replicação viral do baculovírus AgMNPV foi observada quando o meio Grace foi suplementado com 10% (v / v) de soro fetal bovino (FBS), extrato de hemolinfa a 1% (v / v) ou 3 % (v / v) de frações de hemolinfa ou subfrações de hemolinfa obtidas por purificação de hemolinfa por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho. A hemolinfa apresentou efeito positivo na síntese de poliedros e replicação aumentada de baculovírus em células de Spodoptera frugiperda (Sf9) (TCID50 / mL), levando à melhora da cultura de células Sf9. O meio Grace suplementado com 10% (v / v) de SFB e 1% (v / v) de hemolinfa proporcionou um aumento da replicação de baculovírus, quando as células foram infectadas com multiplicidade de infecção de 1. Nesse caso, a replicação de baculovírus foi de 6.443,91 vezes maior do que o obtido com o controle: meio Grace suplementado com 10% (v / v) de FBS. Além disso, este trabalho sugere que a hemolinfa de L. obliqua poderia ter uma aplicação interessante em biotecnologia, devido ao aumento da viabilidade das células e à replicação do vírus. |
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O objetivo deste trabalho foi identificar proteínas obtidas da hemolinfa de Lonomia obliqua com potencial aplicação na otimização da replicação do baculovírus AgMNPV em cultura de células de inseto Sf9. Neste trabalho, a melhoria da cultura celular e replicação viral do baculovírus AgMNPV foi observada quando o meio Grace foi suplementado com 10% (v / v) de soro fetal bovino (FBS), extrato de hemolinfa a 1% (v / v) ou 3 % (v / v) de frações de hemolinfa ou subfrações de hemolinfa obtidas por purificação de hemolinfa por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho. A hemolinfa apresentou efeito positivo na síntese de poliedros e replicação aumentada de baculovírus em células de Spodoptera frugiperda (Sf9) (TCID50 / mL), levando à melhora da cultura de células Sf9. O meio Grace suplementado com 10% (v / v) de SFB e 1% (v / v) de hemolinfa proporcionou um aumento da replicação de baculovírus, quando as células foram infectadas com multiplicidade de infecção de 1. Nesse caso, a replicação de baculovírus foi de 6.443,91 vezes maior do que o obtido com o controle: meio Grace suplementado com 10% (v / v) de FBS. Além disso, este trabalho sugere que a hemolinfa de L. obliqua poderia ter uma aplicação interessante em biotecnologia, devido ao aumento da viabilidade das células e à replicação do vírus.The baculovirus Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV), a member of the family Baculoviridae, has been widely applied as a biopesticide for the control of the velvetbean caterpillar, a pest of soybean crop field. Baculoviruses are considered safe and efficient agents for this purpose, because they do not infect vertebrates, being safe for the health of humans and animals, as well as to the environment. The objective of this work was to identify proteins obtained from Lonomia obliqua hemolymph with potential application in the optimization of baculovirus AgMNPV replication in Sf9 insect cell culture. In this work the improvement of the cell culture and viral replication of the AgMNPV baculovirus was observed when Grace medium was supplemented with 10 % (v/v) Fetal Bovine Serum (FBS), 1 % (v/v) hemolymph extract, or 3 % (v/v) of hemolymph fractions or hemolymph sub-fractions obtained by purifying hemolymph through High Performance Liquid Chromatography. Hemolymph presented a positive effect on the synthesis of polyhedra and enhanced baculovirus replication in Spodoptera frugiperda (Sf9) cells (TCID50/mL), and led to Sf9 cell culture improvement. Grace medium supplemented with 10 % (v/v) FBS and 1 % (v/v) hemolymph provided an increase of baculovirus replication, when the cells were infected with multiplicity of infection of 1. In this case, the baculovirus replication was 6,443.91 times greater than that obtained with the control: Grace medium supplemented with 10 % (v/v) FBS. In addition, this work suggests that hemolymph from L. obliqua could have an interesting application in biotechnology, due to an increase in the viability of the cells and virus replication.2020-12-31Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Centro Integrado de Protótipos, Biofármacos e Reativos para Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Instituto Butantã. Laboratório de Parasitologia. São Paulo, SP, Brasil.Instituto Butantã. Laboratório de Parasitologia. São Paulo, SP, Brasil.engBaculovírusSpodoptera frugiperdaLonomia obliquaHemolinfaBaculovirusSpodoptera frugiperdaLonomia obliquaHemolymphBaculoviridaeSpodopteraHemolinfaImproved replication of the baculovirus Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) in vitro using proteins from Lonomia obliqua hemolymphinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37882/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALF62-10616_2014_Article_9689.pdfapplication/pdf672878https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37882/2/F62-10616_2014_Article_9689.pdfde9a03c7892664b688d5b379b329a724MD52TEXTF62-10616_2014_Article_9689.pdf.txtF62-10616_2014_Article_9689.pdf.txtExtracted texttext/plain46439https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37882/3/F62-10616_2014_Article_9689.pdf.txt5f183ba05f3dccd62572439d74ac22baMD53icict/378822021-03-24 16:32:41.127oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352021-03-24T19:32:41Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false |
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