Avaliação da reação em cadeia da polimerase na detecção de trypanosoma cruzi em soro e em sangue de pacientes com doença de chagas crônica
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Data de Publicação: | 2010 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60961 |
Resumo: | O diagnóstico sorológico da doença de Chagas apresenta algumas desvantagens, tanto na fase aguda devido à falta de kits comerciais aprovados pela ANVISA, quanto na fase crônica, nos casos de diagnósticos inconclusivos ou discordantes, além de não ser o método ideal para diagnosticar a infecção por transmissão congênita. Uma alternativa para a confirmação é o uso da técnica da PCR que apresenta alta sensibilidade e especificidade. No presente trabalho, objetivou-se avaliar a eficácia da ferramenta da biologia molecular, indicada pelo Ministério da Saúde como diagnóstico confirmatório da doença de Chagas, a PCR, utilizando amostras de soro como um potencial meio de extração de DNA do parasito. Para isso, foram coletadas amostras de sangue e soro de 65 pacientes chagásicos (FC=39, FM=10, FD=5, FI=9 e DES=2), selecionados no Ambulatório de Doença de Chagas do Hospital Universitário Oswaldo Cruz. Todos os pacientes foram avaliados clinicamente para caracterização das formas clínicas e realizaram exames confirmatórios para infecção pelo T. cruzi. Além disso, também foram coletadas amostras de 35 indivíduos não chagásicos (área endêmica=9 e área não endêmica=26) que apresentaram sorologia negativa para infecção. Inicialmente, foram analisadas três formas de extração do material de sangue e soro. Após a escolha da melhor forma de extração, as amostras de sangue e soro dos pacientes chagásicos crônicos e não chagásicos foram aplicados na técnica de PCR com a finalidade de avaliar a sensibilidade e especificidade, como também a concordância dos resultados. Ocorreu predominância da forma cardíaca (60%) entre os portadores da infecção pelo T. cruzi. Os resultados da técnica de PCR, utilizando amostras de soro, apresentaram uma sensibilidade estatisticamente superior (61,3%) à amostra de sangue (41,5%). Quando analisado o resultado utilizando as amostras simultaneamente (sangue e soro), obteve-se um valor da sensibilidade aumentado para 78,5%, sendo estatisticamente semelhante ao obtido com o soro e diferente com o sangue. O resultado da estatística mostrou que não existiram diferenças entre as especificidades analisadas. A concordância observada foi de 77,9% (sendo considerada “boa”) com amostras de soro. Portanto, a técnica de PCR aqui padronizada, por apresentar fácil leitura dos resultados, é um potencial método molecular a ser aplicado em laboratórios de diagnóstico para confirmação de resultados inconclusivos. |
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Melo, Myllena de Fátima Alheiros DiasConstança Felícia de Paola, BrittoNeves, Maria HelenaSouza, Paulo Roberto EleutérioGomes, Yara de MirandaGomes, Yara de Miranda2023-10-27T12:19:36Z2023-10-27T12:19:36Z2010MELO, Myllena de Fátima Alheiros Dias. Avaliação da reação em cadeia da polimerase na detecção de Trypanosoma cruzi em soro e em sangue de pacientes com doença de Chagas crônica. 2010. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) – Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2010.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60961O diagnóstico sorológico da doença de Chagas apresenta algumas desvantagens, tanto na fase aguda devido à falta de kits comerciais aprovados pela ANVISA, quanto na fase crônica, nos casos de diagnósticos inconclusivos ou discordantes, além de não ser o método ideal para diagnosticar a infecção por transmissão congênita. Uma alternativa para a confirmação é o uso da técnica da PCR que apresenta alta sensibilidade e especificidade. No presente trabalho, objetivou-se avaliar a eficácia da ferramenta da biologia molecular, indicada pelo Ministério da Saúde como diagnóstico confirmatório da doença de Chagas, a PCR, utilizando amostras de soro como um potencial meio de extração de DNA do parasito. Para isso, foram coletadas amostras de sangue e soro de 65 pacientes chagásicos (FC=39, FM=10, FD=5, FI=9 e DES=2), selecionados no Ambulatório de Doença de Chagas do Hospital Universitário Oswaldo Cruz. Todos os pacientes foram avaliados clinicamente para caracterização das formas clínicas e realizaram exames confirmatórios para infecção pelo T. cruzi. Além disso, também foram coletadas amostras de 35 indivíduos não chagásicos (área endêmica=9 e área não endêmica=26) que apresentaram sorologia negativa para infecção. Inicialmente, foram analisadas três formas de extração do material de sangue e soro. Após a escolha da melhor forma de extração, as amostras de sangue e soro dos pacientes chagásicos crônicos e não chagásicos foram aplicados na técnica de PCR com a finalidade de avaliar a sensibilidade e especificidade, como também a concordância dos resultados. Ocorreu predominância da forma cardíaca (60%) entre os portadores da infecção pelo T. cruzi. Os resultados da técnica de PCR, utilizando amostras de soro, apresentaram uma sensibilidade estatisticamente superior (61,3%) à amostra de sangue (41,5%). Quando analisado o resultado utilizando as amostras simultaneamente (sangue e soro), obteve-se um valor da sensibilidade aumentado para 78,5%, sendo estatisticamente semelhante ao obtido com o soro e diferente com o sangue. O resultado da estatística mostrou que não existiram diferenças entre as especificidades analisadas. A concordância observada foi de 77,9% (sendo considerada “boa”) com amostras de soro. Portanto, a técnica de PCR aqui padronizada, por apresentar fácil leitura dos resultados, é um potencial método molecular a ser aplicado em laboratórios de diagnóstico para confirmação de resultados inconclusivos.The serological diagnosis have some drawbacks, both in the acute phase due to lack of commercial kits approved by the ANVISA, and chronic phase, in cases of inconclusive or conflicting diagnoses, and serology is not the ideal method for diagnose infection by congenital transmission. An alternative to confirm the diagnosis of the disease is the use of PCR, because it has high sensitivity and specificity. The present study aimed to evaluate the effectiveness of the tool of molecular biology, designated by the Ministry of Health as a confirmatory diagnosis of Chagas disease, PCR, using serum samples as a potential means of extraction of parasite DNA. For this end, samples of blood and serum from 65 patients with Chagas disease were collected (CF=39, MF=10, DF=5, IF=9 and UNK=2), selected in Ambulatory of Chagas Disease of the Hospital Universitário Oswaldo Cruz. All patients were clinically evaluated for characterization of clinical forms and performed confirmatory tests for infection by T. cruzi. In addition, samples were collected from 35 non chagasic individuals (endemic area=9 and non-endemic area=26) tested negative for infection by T. cruzi. Initially, we analyzed three ways of extracting the material from blood and serum. After choosing the best extraction, samples of blood and serum from patients with chronic Chagas disease and individuals non chagasic were used in the PCR in order to evaluate the sensitivity and specificity of the technique, but also the agreement of the results. There was predominance of the heart form (60%) among patients with the infection by T. cruzi. The results of PCR using serum samples showed a statistically higher sensitivity (61.3%) than blood sample (41.5%). When analyzing the results using the two samples (blood and serum), we obtained a value of the sensitivity increased to 78.5%, statistically similar to that obtained with serum and with different blood. The result of the statistics showed that there were no differences between the characteristics analyzed. The concordance rate was 77.9% (being considered "good") with serum samples. Therefore, the PCR standard here, for presenting the results easy to read, is a potential molecular method to be applied in diagnostic laboratories for confirmation of inconclusive results.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.Universidade Federal Rural de Pernambuco. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.porDoença de ChagasReação em Cadeia da PolimeraseTrypanosoma cruziChagas diseasePolymerase Chain ReactionTrypanosoma cruzila enfermedad de ChagasReacción en cadena de la polimerasatripanosoma cruziLa maladie de ChagasRéaction en chaîne par polyméraseTrypanosoma cruziAvaliação da reação em cadeia da polimerase na detecção de trypanosoma cruzi em soro e em sangue de pacientes com doença de chagas crônicainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2010-03-05Instituto Aggeu MagalhãesRecifePrograma de Pós-Graduação em Saúde Públicainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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