Ensaio do linfonodo local murino: avaliação com o marcador de proliferação celular bromodeoxiuridina e de subpopulações de linfócitos para análise do potencial irritante e/ou alergênico de substâncias

• Autor(a) principal: Santos, Bárbara Andréa Fortes
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/9558
• topic: Ensaio Local de Linfonodo; Bromodesoxiuridina; Dermatite de Contato; Vigilância Sanitária

O Ensaio do linfonodo local murino (LLNA) foi desenvolvido como uma alternativa aos testes de Buhler e Maximização. Esse teste é utilizado com o objetivo de discriminar substâncias capazes de induzir dermatite de contato e tem como desfecho a quantificação celular nos linfonodos auriculares de camundongos. Esse ensaio embora recomendado por agências internacionais envolvidas no desenvolvimento de metodologias alternativas (ICCVAM e ECVAM), ainda necessita de aprimoramento, isso porque o desfecho de proliferação se mostrou falho principalmente quando substâncias de ação sensibilizante fraca ou moderada foram o alvo da investigação. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo a padronização do método LLNA alternativo, através da quantificação de proliferação celular utilizando um reagente não radioativo (BrdU). Além disso, possíveis diferenças nos padrões de subpopulações linfocitárias entre camundongos tratados com substâncias irritantes e sensibilizantes foram também investigadas, com o objetivo de buscar um aprimoramento do teste. Para tal fim, os animais foram tratados com os sensibilizantes dinitroclorobenzeno (DNCB) e parafenilenidiamina (PPD) e os irritantes lauril sulfato de sódio (LSS) e tritonX-100 (TX-100), por 3 dias consecutivos no dorso de ambas as orelhas. As subpopulações foram analisadas por citometria de fluxo e por imunofluorescência. A citocina TNF-α no soro desses animais e possíveis alterações patológicas nas orelhas dos animais foram também analisadas. Os resultados obtidos demonstraram um aumento no número de células nos linfonodos de animais tratados com sensibilizantes e irritantes, quando comparados com os controles, porém um aumento da proliferação celular medida por BrdU foi observado apenas para os grupos tratados com as substâncias sensibilizantes...