Papel da caspase-1 na infecção experimental pelo vírus Chikungunya
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) |
Texto Completo: | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/40947 |
Resumo: | O Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus da família Togaviridae, gênero Alphavirus, transmitido por vetores do gênero Aedes. Os principais sintomas da febre Chikungunya incluem febre, artralgia severa, mialgia, cefaleia e exantemas, podendo ser detectados também casos envolvendo complicações neurológicas, como a Síndrome de Guillaín-Barré, meningoencefalite, mielite entre outras patologias do sistema nervoso central (SNC). Dessa forma, este trabalho visa identificar o papel da caspase-1 durante infecção pelo vírus Chikungunya buscando elucidar formas de prevenção às complicações, visto que ainda não há tratamentos específicos contra o vírus. Inicialmente, a infecção foi realizada em células de linhagem neuronal (SH-SY5Y) utilizando um MOI de 0,5. Para confirmação da infecção foi realizada imunofluorescência utilizando anticorpos específicos anti-CHIKV nos tempos de 12, 24, 36 e 48 horas pós infecção (hpi). Nas mesmas condições foi avaliada a cinética de replicação do vírus por meio de ensaio de placa, onde foi observado um pico da replicação em 36 hpi. Ainda sob o contexto celular foi realizado o ensaio de morte celular, utilizando anexina V/7AAD, pelo qual foi observada uma taxa de morte crescente a partir de 36 hpi. Um dos elementos da via em estudo, a caspase-1, foi marcada nos diferentes tempos detectando-se uma crescente ativação. Além disso, níveis de IL-1β foram dosados no sobrenadante observando-se uma diminuição nesses níveis em 36 e 48 hpi. Estudos prévios já demonstraram que de fato o CHIKV é capaz de infectar e se replicar em SH-SY5Y, porém, não se tem dados à respeito dos níveis de caspase-1 ativadas em cultura celular. Em relação aos níveis de IL-1β, torna-se importante avaliar mecanismos anti-inflamatórios que possam estar envolvidos. O CHIKV é capaz de ativar caspase-1, porém necessita-se de mais estudos a fim de elucidar mecanismos imunológicos em 36 e 48 hpi. |
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Farias, Pablo Cantalice SantosFrança, Rafael Freitas de OliveiraFonseca, Clarice Neuenschwander Lins de MoraisSantos, Débora Regina Lopes dosFrança, Rafael Freitas de Oliveira2020-04-23T20:39:55Z2020-04-23T20:39:55Z2019FARIAS, Pablo Cantalice Santos Farias. Papel da caspase-1 na infecção experimental pelo vírus Chikungunya. 2019. 81f. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia em Saúde) – Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2019.https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/40947O Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus da família Togaviridae, gênero Alphavirus, transmitido por vetores do gênero Aedes. Os principais sintomas da febre Chikungunya incluem febre, artralgia severa, mialgia, cefaleia e exantemas, podendo ser detectados também casos envolvendo complicações neurológicas, como a Síndrome de Guillaín-Barré, meningoencefalite, mielite entre outras patologias do sistema nervoso central (SNC). Dessa forma, este trabalho visa identificar o papel da caspase-1 durante infecção pelo vírus Chikungunya buscando elucidar formas de prevenção às complicações, visto que ainda não há tratamentos específicos contra o vírus. Inicialmente, a infecção foi realizada em células de linhagem neuronal (SH-SY5Y) utilizando um MOI de 0,5. Para confirmação da infecção foi realizada imunofluorescência utilizando anticorpos específicos anti-CHIKV nos tempos de 12, 24, 36 e 48 horas pós infecção (hpi). Nas mesmas condições foi avaliada a cinética de replicação do vírus por meio de ensaio de placa, onde foi observado um pico da replicação em 36 hpi. Ainda sob o contexto celular foi realizado o ensaio de morte celular, utilizando anexina V/7AAD, pelo qual foi observada uma taxa de morte crescente a partir de 36 hpi. Um dos elementos da via em estudo, a caspase-1, foi marcada nos diferentes tempos detectando-se uma crescente ativação. Além disso, níveis de IL-1β foram dosados no sobrenadante observando-se uma diminuição nesses níveis em 36 e 48 hpi. Estudos prévios já demonstraram que de fato o CHIKV é capaz de infectar e se replicar em SH-SY5Y, porém, não se tem dados à respeito dos níveis de caspase-1 ativadas em cultura celular. Em relação aos níveis de IL-1β, torna-se importante avaliar mecanismos anti-inflamatórios que possam estar envolvidos. O CHIKV é capaz de ativar caspase-1, porém necessita-se de mais estudos a fim de elucidar mecanismos imunológicos em 36 e 48 hpi.Chikungunya (CHIKV) is an arbovirus of the family Togaviridae, genus Alphavirus, transmitted by vectors of the genus Aedes. The main symptoms of Chikungunya fever include fever, severe arthralgia, myalgia, headache and exanthemas, and cases involving neurological complications such as Guillaïn-Barré syndrome, meningoencephalitis, myelitis and other central nervous system (CNS) pathologies may also be detected. Thus, this work aims to identify the role of caspase-1 during Chikungunya virus infection seeking to elucidate ways of preventing complications, since there are still no specific treatments against the virus. Initially, the infection was performed on neuronal lineage cells (SH-SY5Y) using a MOI of 0.5. For confirmation of infection, immunofluorescence was performed using specific anti-CHIKV antibodies at times of 12, 24, 36 and 48 hours post infection (hpi). Under the same conditions the kinetics of virus replication was evaluated by plaque assay, where a replication peak was observed at 36 hpi. Still under the cellular context was carried out the cell death assay, using annexin V / 7AAD, for which a growing death rate was observed from 36 hpi. One of the elements of the pathway under study, caspase-1, was marked at different times by detecting increased activation. In addition, IL-1β levels were measured in the supernatant, with a decrease in these levels by 36 and 48 hpi. Previous studies have shown that in fact CHIKV is capable of infecting and replicating in SH-SY5Y, however, no data are available on activated caspase-1 levels in cell culture. Regarding IL-1β levels, it becomes important to evaluate anti-inflammatory mechanisms that may be involved. CHIKV is able to activate caspase-1, but further studies are needed to elucidate immunological mechanisms at 36 and 48 hpi.Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco (FACEPE)Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.porVírus ChikungunyaCaspase 1InflamassomosChikungunya VirusCaspase-1InflammassomesVírus ChikungunyaCaspase 1InflamassomosPapel da caspase-1 na infecção experimental pelo vírus ChikungunyaRole of caspase-1 in experimental Chikungunya virus infectioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2019-11-04Fundação Oswaldo. Instituto Aggeu Magalhães.Mestrado AcadêmicoRecife/PEPrograma de pós-graduação em Biociências e Biotecnologia em Saúde.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-83094https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/40947/1/license.txtee3692f7b0b97d5638099ab94397d05fMD51ORIGINALDissertaá∆o Pablo Cantalice oficial (1) (1).pdfDissertaá∆o Pablo Cantalice oficial (1) (1).pdfapplication/pdf1774800https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/40947/2/Dissertaa%cc%81%e2%88%86o%20Pablo%20Cantalice%20oficial%20%281%29%20%281%29.pdf58d5b05c3b252e6b13987b1b881e8f9aMD52TEXTDissertaá∆o Pablo Cantalice oficial (1) (1).pdf.txtDissertaá∆o Pablo Cantalice oficial (1) (1).pdf.txtExtracted 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