Estudo do papel imunomodulador e antileishmania da fisalina F em macrófagos humanos.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Grimaldi, Gabriela Bittencourt
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58278
Resumo: INTRODUÇÃO: Os macrófagos são importantes células em processos inflamatórios e a sua desregulação pode afetar diversas doenças, tais como doenças autoimunes e doenças parasitárias. As leishmanioses, um conjunto de doenças tropicais negligenciadas, estão incluídas nesta categoria de enfermidades. A leishmaniose cutânea é caracterizada por úlceras em área de tegumento e a sua gravidade está relacionada com a imunopatogênese. O tratamento disponível é citotóxico, está associado à falha terapêutica, resistência parasitária, alto custo e tempo de administração prolongado. A fisalina F possui propriedades farmacológicas promissoras com potente atividade antileishmania e imunomoduladora em camundongos. OBJETIVO: Este trabalho teve como objetivo avaliar o papel imunomodulador em macrófagos humanos e a atividade anti-Leishmania braziliensis da fisalina F, in vitro. MATERIAL E MÉTODOS: Macrófagos humanos foram obtidos de PBMC de doadores sadios. A dosagem de citocinas inflamatórias foi realizada pelo método de ELISA no sobrenadante de macrófagos humanos estimulados com LPS e com adição ou não de fisalina F ou dexametasona. A citotoxicidade da fisalina F em macrófagos humanos e a viabilidade de promastigotas de L. braziliensis foram mensuradas utilizando o Alamar Blue®. A atividade antiparasitária da fisalina F em macrófagos humanos foi determinada após 24 horas de infecção com L. braziliensis. Ensaios de citometria de fluxo e de microscopia eletrônica foram realizados para avaliação dos possíveis mecanismos de ação da fisalina F em promastigotas de L. braziliensis. RESULTADOS: A fisalina F reduziu a produção das citocinas pró-inflamatórias IL-6, IL-1β e TNF-α por macrófagos ativados. Nos ensaios de citotoxicidade, apresentou o valor de CC50 de 6,07 ± 1,17 µM. Este composto também inibiu a proliferação de formas promastigotas de L. braziliensis, com valor de IC50 de 10,85 ± 0,99 µM e reduziu o número de macrófagos infectados e o número de amastigotas por macrófago, quando comparado com os controles. Em promastigotas, o surgimento de inclusões lipídicas, encurtamento do corpo celular, a destruição e o afrouxamento de membrana foram observados na análise ultraestrutural por MEV e MET após o tratamento com fisalina F. Análises de citometria de fluxo indicam que a fisalina F induz um mecanismo de morte similar a apoptose em L. braziliensis. CONCLUSÕES: A fisalina F inibiu a ativação de macrófagos humanos e promoveu uma atividade anti- L. braziliensis eficaz em promastigotas e em amastigotas
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CONCLUSÕES: A fisalina F inibiu a ativação de macrófagos humanos e promoveu uma atividade anti- L. braziliensis eficaz em promastigotas e em amastigotasINTRODUCTION: Macrophages are important cells in inflammatory processes, and their deregulation can affect several diseases, such as autoimmune diseases and parasitic diseases. Leishmaniasis, a group of neglected tropical diseases, is included in this category of diseases. Cutaneous leishmaniasis is characterized by ulcers in the tegument area and its severity is related to immunopathogenesis. The available treatment is cytotoxic, associated with therapeutic failure, parasite resistance, high cost and prolonged administration time. Physalin F has promising pharmacological properties with potent antileishmanial and immunomodulatory activity in mice. OBJECTIVE: This study aimed to evaluate the immunomodulatory role in human macrophages and the anti-Leishmania braziliensis activity of physalin F in vitro. MATERIAL AND METHODS: Human macrophages were obtained from PBMC from healthy donors. The dosage of inflammatory cytokines was performed by the ELISA method in the supernatant of human macrophages stimulated with LPS and with or without the addition of physalin F or dexamethasone. The cytotoxicity of physalin F on human macrophages and the viability of L. braziliensis promastigotes were measured using Alamar Blue®. The antiparasitic activity of physalin F on human macrophages was determined after 24 hours of infection with L. braziliensis. Flow cytometry and electron microscopy assays were performed to evaluate the possible mechanisms of action of physalin F in L. braziliensis promastigotes. RESULTS: Physalin F reduced the production of the pro inflammatory cytokines IL-6, IL-1β and TNF-α by activated macrophages. In the cytotoxicity assays, it presented a CC50 value of 6.07 ± 1.17 µM. This compound also inhibited the proliferation of promastigote forms of L. braziliensis, with an IC50 value of 10.85 ± 0.99 µM, and reduced the number of infected human macrophages and the number of amastigotes per macrophage, when compared to controls. In promastigotes, the appearance of lipid inclusions, rounding of the cell body, destruction and loosening of the cell membrane were observed in the ultrastructural analysis by MEV and MET after treatment with physalin F. Flow cytometry analyzes indicate that physalin F induces apoptosis in L. braziliensis. CONCLUSIONS: Physalin F inhibited the activation of human macrophages and promoted an effective anti-L. braziliensis activity, in both promastigotes and amastigotesCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) . Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB).Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.porMacrófago humanoFisalina FImunomodulaçãoLeishmaniose cutâneaHuman macrophagePhysalin FImmunomodulationCutaneous leishmaniasisMacrofagosFisalinasImunomodulaçãoLeishmaniose CutanêaEstudo do papel imunomodulador e antileishmania da fisalina F em macrófagos humanos.Study of the immunomodulatory and antileishmania role of physalin F in human macrophages.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2022Instituto Gonçalo MonizMestrado AcadêmicoSalvadorPrograma de Pós-Graduação em Patologia Humana e Experimentalinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/58278/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALgabriela_grimaldi_fioba_mest_2022.pdfapplication/pdf5265545https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/58278/2/gabriela_grimaldi_fioba_mest_2022.pdf327654fe1aa5a977e0fd2a05aadb1a86MD52icict/582782023-05-10 10:12:29.465oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352023-05-10T13:12:29Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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