Características fenotípicas de isolados de Histoplasma capsulatum circulantes no Estado do Rio de Janeiro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pinto, Gabriela Costa Maia
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37323
Resumo: Histoplasma capsulatum var. capsulatum, agente da histoplasmose clássica, é encontrado com grande frequência no continente americano, sendo o Estado do Rio de Janeiro no Brasil, uma área endêmica da doença. Entretanto, a incidência real da histoplasmose no Brasil é desconhecida, uma vez que esta micose não está incluída na lista de doenças de notificação compulsória. Casos de histoplasmose são subestimados, provavelmente pelo diagnóstico laboratorial inconclusivo desta micose, o que nos leva a especular a possibilidade de associação desses fenótipos a diferentes formas clínicas. Além disso, alguns estudos demonstraram diferenças fenotípicas e genotípicas em isolados de H. capsulatum de diferentes regiões geográficas do país. Sendo assim, através do presente estudo buscamos caracterizar os perfis fenotípicos de isolados de H. capsulatum circulantes no Estado do Rio de Janeiro. Para esta avaliação foram utilizados 30 isolados de H. capsulatum de origem clínica, incluindo isolados de seres humanos e animais, e ambientais. A metodologia utilizada para a caracterização dos isolados incluiu a descrição de características macro e micromorfológicas in vitro, a capacidade de crescimento em pH ácido e básico, produção de melanina e urease, capacidade de conversão da fase miceliana à leveduriforme, produção de exoantígenos e a classificação em fenótipo albino ou brown A capacidade de conversão foi variável nos isolados, sendo o meio ML-GEMA o mais indicado para esta técnica, e características morfológicas clássicas, como presença de macroconídios e microconídios foram identificadas nos isolados. Todos os isolados apresentaram produção de pelo menos um tipo de melanina e urease e a capacidade de crescer em diferentes valores de pH, tais como 4,0, 5,5, 7,0 e 10,0. A presença de antígenos específicos de H. capsulatum foi verificada em 28 isolados, sendo 22 para o antígeno M e seis para ambos os antígenos H e M na técnica de western-blot e em apenas um isolado por imunodifusão dupla, apresentando reatividade para o antígeno M. A maioria dos isolados (n=28) apresentou fenótipo brown quando semeados em meio Sabouraud modificado acrescido de roxo de bromocresol. Podemos concluir que a caracterização morfológica, associada à pesquisa de antígenos pela técnica de western-blot são ferramentas úteis para a caracterização de isolados de H. capsulatum e que a produção de melanina e urease podem ser avaliadas em estudos futuros como fatores de virulência.
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Casos de histoplasmose são subestimados, provavelmente pelo diagnóstico laboratorial inconclusivo desta micose, o que nos leva a especular a possibilidade de associação desses fenótipos a diferentes formas clínicas. Além disso, alguns estudos demonstraram diferenças fenotípicas e genotípicas em isolados de H. capsulatum de diferentes regiões geográficas do país. Sendo assim, através do presente estudo buscamos caracterizar os perfis fenotípicos de isolados de H. capsulatum circulantes no Estado do Rio de Janeiro. Para esta avaliação foram utilizados 30 isolados de H. capsulatum de origem clínica, incluindo isolados de seres humanos e animais, e ambientais. A metodologia utilizada para a caracterização dos isolados incluiu a descrição de características macro e micromorfológicas in vitro, a capacidade de crescimento em pH ácido e básico, produção de melanina e urease, capacidade de conversão da fase miceliana à leveduriforme, produção de exoantígenos e a classificação em fenótipo albino ou brown A capacidade de conversão foi variável nos isolados, sendo o meio ML-GEMA o mais indicado para esta técnica, e características morfológicas clássicas, como presença de macroconídios e microconídios foram identificadas nos isolados. Todos os isolados apresentaram produção de pelo menos um tipo de melanina e urease e a capacidade de crescer em diferentes valores de pH, tais como 4,0, 5,5, 7,0 e 10,0. A presença de antígenos específicos de H. capsulatum foi verificada em 28 isolados, sendo 22 para o antígeno M e seis para ambos os antígenos H e M na técnica de western-blot e em apenas um isolado por imunodifusão dupla, apresentando reatividade para o antígeno M. A maioria dos isolados (n=28) apresentou fenótipo brown quando semeados em meio Sabouraud modificado acrescido de roxo de bromocresol. Podemos concluir que a caracterização morfológica, associada à pesquisa de antígenos pela técnica de western-blot são ferramentas úteis para a caracterização de isolados de H. capsulatum e que a produção de melanina e urease podem ser avaliadas em estudos futuros como fatores de virulência.Histoplasma capsulatum, agent of classical histoplasmosis, is found frequently in the Americas, and the State of Rio de Janeiro in Brazil is considered endemic area of this disease. However, the actual incidence of histoplasmosis in Brazil is unknown, as this mycosis is not included in the list of reportable diseases. Cases of histoplasmosis are underestimated, probably due to inconclusive laboratory diagnosis of this mycoses. In addition, some studies have shown phenotypic differences in isolates of H. capsulatum from differents geographics regions of the country, which leads us to speculate the possibility of association of these phenotypes to different clinical forms of the disease. Thus, in the present study we sought to characterize the phenotypic profiles of isolates of H. capsulatum circulating in the State of Rio de Janeiro. For this evaluation 30 H. capsulatum isolates of clinical, animal and environmental origin were included in this study. The methodology used for the characterization of the isolates included the description of macro and micromorphological characteristics in vitro, the growth capacity in acid and basic pH, melanin and urease production, ability to convert from mycelial to yeast phase, exoantigens production and classification in albino or brown phenotype. The conversion capacity was variable, isolatedependent, and the medium ML-GEMA was the most indicated for this technique. Classical morphological chacarteristics such as the presence of macroconidia and microconidia were identified in the isolates. All isolates showed production of urease, and at least one type of melanin, and the ability to grow at different pH values such as 4.0, 5.5, 7.0 and 10.0. The presence of H. capsulatum’s antigens was verified in 28 isolates, 22 isolates presented M antigen, and six H and M antigens on a Western blot technique and in one isolated M antigen was demonstrated by double immunodiffusion. Most isolates showed brown phenotype (n = 28) when plated on modified Sabouraud broth with bromocresol purple. We conclude that the morphological characterization associated with the antigens search by western blot technique are useful tools for the characterization of isolates of H. capsulatum and melanin and urease production can be tested in future studies as virulence factors.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.porHistoplasma capsulatumFenotipagemMelaninaUreaseFenótiposHistoplasmaFenotipoMelaninasUreaseCaracterísticas fenotípicas de isolados de Histoplasma capsulatum circulantes no Estado do Rio de Janeiroinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2015Instituto Nacional de Infectologia Evandro ChagasFundação Oswaldo CruzRio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosasinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37323/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALgabriela_pinto_ini_mest_2015.pdfapplication/pdf1477351https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37323/2/gabriela_pinto_ini_mest_2015.pdfa0bf8d3f1730d9b32420bbb29fbc9146MD52TEXTgabriela_pinto_ini_mest_2015.pdf.txtgabriela_pinto_ini_mest_2015.pdf.txtExtracted texttext/plain136101https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37323/3/gabriela_pinto_ini_mest_2015.pdf.txtf77f4497dc41768bfc19c120b4aa5c48MD53icict/373232019-11-23 02:05:16.325oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352019-11-23T05:05:16Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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