Detecção e caracterização molecular de norovírus circulantes em moluscos bivalves e humanos no Nordeste brasileiro

• Autor(a) principal: Guarines, Klarissa Miranda
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60204
• topic: Bivalves; Norovírus; Reação em cadeia da polimerase em tempo real; Sequenciamento de Nucleotídeos em Larga Escala; Bivalves; Norovirus; Real-time polymerase chain reaction; Large Scale Nucleotide Sequencing; Bivalves; Norovírus; Reação em cadeia da polimerase em tempo real; Sequenciamento de Nucleotídeos em Larga Escala

O norovírus (NoV) é o principal agente etiológico de surtos de gastroenterites no mundo. Estima-se que 15% dos surtos de NoV são causados por alimentos contaminados, dentre os quais os moluscos bivalves têm especial importância. Trata-se de um vírus geneticamente diverso e o monitoramento de sua distribuição e variabilidade genética é de extrema importância. O objetivo desse trabalho foi mapear, de maneira inédita, a distribuição do NoV nos litorais Paraibano e Pernambucano, além de caracterizar molecularmente as cepas de NoV circulantes na região. Para isso, foram realizadas coletas de moluscos bivalves na Paraíba (PB) e em Pernambuco (PE). Para o processamento, os moluscos foram lavados e tiveram a porção correspondente ao divertículo gástrico pesada e tratada com proteinase K 100µl/ml em igual volume. Foram coletadas também amostras de fezes de humanos sabidamente acometidos com NoV. O RNA foi extraído dessas amostras utilizando-se kit comercial e a detecção viral foi realizada por uma nova RT-qPCR padronizada usando primers específicos. Para sequenciamento, as amostras foram amplificadas por PCR convencional após transcrição reversa, utilizando-se iniciadores desenhados nesse estudo. Foram coletados 1880 moluscos, sendo 1000 mariscos, 560 ostras e 320 sururus. Após processamento e extração, essas amostras resultaram em 463 RNAs que foram submetidos à RT-qPCR. Todas as amostras foram negativas. Em relação às amostras de humanos, foram coletadas 21 amostras de pacientes positivos para NoV, as quais foram sequenciadas usando Sequenciamento de Nova Geração (NGS) ou Sanger. As características clínicas desses pacientes também foram analisadas. O genótipo de NoV mais encontrado foi o GII.Pe-GII.4. A ausência do vírus em amostras de moluscos já foi relatada em outros países. A epidemiologia molecular e os estudos de vigilância da diversidade genética dos NoV devem continuar para monitorar a emergência e prevalência de novas cepas e estabelecer os padrões de transmissão.