Multiplex qPCR para detecção e quantificação simultânea dos vírus da subfamília Betaherpesvirinae em pacientes com falência hepática aguda sem etiologia definida

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Raposo, Jéssica Vasques
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/22940
Resumo: Os Betaherpesvírus são comuns em todo o mundo, com prevalência de 70-80% em indivíduos adultos. A infecção pelos Betaherpesvírus pode ser assintomática e passar despercebida, mas o vírus pode permanecer latente até que uma deficiência imunológica do hospedeiro favoreça sua reativação. Os Betaherpesvírus estão relacionados a diversas doenças. O HCMV, o HHV-6 A/B e o HHV-7 já foram relatados em casos de pacientes com falência hepática aguda (FHA). O mau prognostico da evolução para hepatite nos casos de herpes está associado ao diagnóstico tardio e ao atraso no tratamento especifico com terapia antiviral. Portanto, a necessidade de um diagnóstico precoce para iniciar a terapia é evidente. Para a detecção e quantificação dos Betaherpesvírus foi otimizado a qPCR multiplex e curvas sintéticas padrões foram utilizadas para quantificação da carga viral em amostras de soro e fígado de pacientes com FHA sem etiologia definida. No total, 25,7% (9/35) das amostras foram positivas para pelo menos um dos Betaherpesvírus, seis foram positivos para o fígado e três para o soro. Além disso, houveram duas co-infecções com mais de um Betaherpesvírus. As amostras que foram positivas no qPCR monoplex, também foram positivas no qPCR multiplex mostrando que é possível realizar apenas uma PCR em tempo real para detectar e diferenciar os Betaherpesvírus. Análises bioquímicas foram realizadas e houve um aumento nas enzimas hepáticas ALT, AST, GAMA-GT e Fosfatase Alcalina nas amostras de FHA positivas para os Betaherpesvírus em comparação com as amostras de FHA negativas e controles. A positividade das amostras ressalta a associação dos Betaherpesvírus a FHA. Assim, o diagnóstico diferencial para os Betaherpesvírus em caso de FHA pode auxiliar para uma terapêutica farmacológica adequada, poupando o paciente do transplante e o sistema da saúde dos custos a este relacionados.
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O HCMV, o HHV-6 A/B e o HHV-7 já foram relatados em casos de pacientes com falência hepática aguda (FHA). O mau prognostico da evolução para hepatite nos casos de herpes está associado ao diagnóstico tardio e ao atraso no tratamento especifico com terapia antiviral. Portanto, a necessidade de um diagnóstico precoce para iniciar a terapia é evidente. Para a detecção e quantificação dos Betaherpesvírus foi otimizado a qPCR multiplex e curvas sintéticas padrões foram utilizadas para quantificação da carga viral em amostras de soro e fígado de pacientes com FHA sem etiologia definida. No total, 25,7% (9/35) das amostras foram positivas para pelo menos um dos Betaherpesvírus, seis foram positivos para o fígado e três para o soro. Além disso, houveram duas co-infecções com mais de um Betaherpesvírus. As amostras que foram positivas no qPCR monoplex, também foram positivas no qPCR multiplex mostrando que é possível realizar apenas uma PCR em tempo real para detectar e diferenciar os Betaherpesvírus. Análises bioquímicas foram realizadas e houve um aumento nas enzimas hepáticas ALT, AST, GAMA-GT e Fosfatase Alcalina nas amostras de FHA positivas para os Betaherpesvírus em comparação com as amostras de FHA negativas e controles. A positividade das amostras ressalta a associação dos Betaherpesvírus a FHA. Assim, o diagnóstico diferencial para os Betaherpesvírus em caso de FHA pode auxiliar para uma terapêutica farmacológica adequada, poupando o paciente do transplante e o sistema da saúde dos custos a este relacionados.Betaherpesviruses are common worldwide, with a prevalence of 70-80% in adult individuals. Betaherpesvirus infection may be asymptomatic, but the virus may remain dormant until a host immune deficiency favors its reactivation. Betaherpesviruses are related to several diseases. HCMV, HHV-6 A / B and HHV-7 have been reported in patients with acute liver failure (FHA). The poor prognosis of progression to hepatitis in cases of herpes is associated with late diagnosis and delay in specific treatment with antiviral therapy. Therefore, the need for an early diagnosis to initiate therapy is evident. For the detection and quantification of Betaherpesvirus the multiplex qPCR was optimized and standard synthetic curves were used to quantify viral load in serum and liver samples from FHA patients with no defined etiology. In total, 25.7% (9/35) of the samples were positive for at least one of the Betaherpesviruses, six were liver positive and three were serum positive. In addition, there were two co-infections with more than one Betaherpesvirus. Samples that were positive in the monoplex qPCR were also positive in the multiplex qPCR showing that it is possible to perform only a real-time PCR to detect and differentiate Betaherpesviruses. Biochemical analyzes were performed and there was an increase in liver enzymes ALT, AST, GAMA-GT and Alkaline Phosphatase in FHApositive samples for Betaherpesvirus compared to negative FHA samples and controls. The positivity of the samples highlights the association of Betaherpesvirus to FHA. Thus, the differential diagnosis for Betaherpesvirus in the case of FHA can aid in adequate pharmacological therapy, saving the patient of the transplantation and the health system of the costs related to it.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.porHerpesviridaeFalência hepática agudaReação em cadeia da polimerase multiplexHepatiteHepatiteHerpesviridaeReação em cadeia da polimerase multiplexFalência hepática agudaMultiplex qPCR para detecção e quantificação simultânea dos vírus da subfamília Betaherpesvirinae em pacientes com falência hepática aguda sem etiologia definidainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis2017Pós-Graduação em Biologia ParasitáriaFundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo CruzMestrado AcadêmicoRio de Janeiro/RJPrograma de Pós-Graduação em Biologia Parasitáriainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22940/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALjessica_raposo_ioc_mest_2017.pdf jessica_raposo_ioc_mest_2017.pdfapplication/pdf1096915https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22940/2/jessica_raposo_ioc_mest_2017.pdf%0906806680cb552dda9d5131c0806fc922MD52TEXTjessica_raposo_ioc_mest_2017.pdf .txtjessica_raposo_ioc_mest_2017.pdf .txtExtracted texttext/plain158527https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/22940/3/jessica_raposo_ioc_mest_2017.pdf%09.txta9d94d2b1c0309676bf52dd660a294ffMD53icict/229402019-09-10 20:35:52.529oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352019-09-10T23:35:52Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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