Avaliação do potencial de regeneração cardíaca após inibição da atividade de TGF-beta em modelo experimental de doença de Chagas crônica

• Autor(a) principal: Abreu, Rayane da Silva
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/26312
• topic: Doença de Chagas; Fibrose; Fator de Crescimento Transformador beta; Doença de Chagas; Fibrose; Fator de Crescimento Transformador beta

Estudos publicados pelo grupo demonstram o envolvimento do TGF-\F062 na cardiopatia chagásica. A deposição excessiva de componentes de matriz extracelular (MEC) induz o processo fibrótico que leva ao comprometimento funcional do coração e o TGF-\F062 se destaca como uma das principais proteínas reguladoras desse processo. As metaloproteases atuam degradando a MEC, e estão diretamente envolvidas no remodelamento cardíaco, tendo sua atividade controlada por TIMPs. Dados paralelos do grupo indicam que animais infectados por T. cruzi durante a fase crônica experimental da doença de Chagas, apresentaram acometimento cardíaco, aumento da expressão e deposição de colágeno no coração e aumento dos níveis circulantes de TGF-\F062. O tratamento com o composto GW788388, inibidor da atividade de TGF-\F062, 120 dias pós-infecção (dpi), foi capaz de: melhorar a condução elétrica cardíaca; reverter a expressão e deposição de colágeno no tecido cardíaco; e diminuir os níveis circulantes do TGF-\F062. O objetivo deste estudo é compreender os mecanismos envolvidos na reversão da fibrose após o tratamento com GW788388, e avaliar possíveis candidatos envolvidos na regeneração cardíaca, durante a fase crônica da doença de Chagas experimental. Para isso, animais C57Bl/6 foram infectados com T. cruzi Cepa colombiana (102) e tratados com 3 mg/kg GW788388, após 120 dpi em dois diferentes esquemas de tratamento: i) 1x por semana ou ii) 3x por semana por via oral, durante 30 dias (até 150 dpi) O coração dos animais foi retirado e proteínas e RNA totais foram extraídos para investigação da expressão de MMP-2 e MMP-9 (RT-qPCR e Western blot), assim como suas atividades proteolíticas (Zimografia). Além disso, também foi investigada a expressão de TIMPs -1, -2 e -4 e troponina T por Western blot; e a expressão gênica de marcadores de regeneração cardíaca: Gata-4, Gata-6, T-box5, Nkx2-5, troponina T, desmina e titina por RT- qPCR. Técnicas histológicas foram utilizadas para avaliação de Cx43. Além disso, foram avaliados os níveis de TIMP-1 circulantes por ELISA. Nossos resultados demonstram que a infecção crônica leva à desorganização de Cx-43 e o tratamento recupera o padrão de Cx-43. Foi observada diminuição da atividade de MMP-2 e -9 com a infecção crônica e o tratamento com GW788388 aumentou suas atividades no coração dos animais. Os níveis de TIMP-1 circulantes aumentam em 120 dias após a infecção e caem 150 dias após a infecção, o tratamento com GW788388 aumenta esses níveis. Entretanto, a expressão cardíaca dos TIMPs -1, -2 e -4 aumentam em 150 dpi e o tratamento com GW788388 reverte esse aumento. A infecção crônica leva a diminuição da expressão de todos os marcadores de regeneração cardíaca avaliados, e o tratamento com GW788388 3x por semana aumentou a expressão de Gata-6 e T-box5. Nossos dados indicam que a reversão da fibrose cardíaca é mediada pela regulação da atividade de MMP-2, -9 por TIMPs. Além disso, o tratamento com GW788388 parece ser capaz de induzir regeneração cardíaca em animais cronicamente infectados, sendo promissor como uma nova possibilidade de tratar a fibrose cardíaca observada na fase crônica da doença de Chagas