Avaliação e aplicação de métodos de genotipagem para estudo da síndrome da musculatura dupla em bovinos da raça Senepol.

• Autor(a) principal: URQUIZA, A. da S. C.
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da EMBRAPA (Repository Open Access to Scientific Information from EMBRAPA - Alice)
• Texto Completo: http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/1082405
• topic: Gene GDF-8; Sequenciamento; Selection; Hipertrofia muscular; Mutação; Seleção; Gado de corte; Fenotipo; Mutation; Sequence analysis

Em várias raças de bovinos de corte é observada a síndrome da musculatura dupla, caracterizada pela presença do fenótipo de hipertrofia muscular, sendo esta uma condição hereditária e controlada pelo gene GDF-8 (Growth Differentiation Factor-8). Em bovinos da raça Senepol, a mutação nt821, localizada no exon III deste gene, é responsável por esta síndrome. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram avaliar três metodologias de genotipagem desta mutação, com o intuito de verificar qual a mais adequada em relação a custo/benefício e verificar a associação do alelo mutado com características de interesse econômico em touros jovens da raça Senepol. Foram extraídos DNA genômico de amostras biológicas de 17 bezerros, sendo sete com o fenótipo da musculatura dupla e dez sem o fenótipo. As amostras de DNA foram quantificadas por espectrofotometria e suas integridades avaliadas em gel de agarose 0,8%. Posteriormente, foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificação do exon III. Foram testadas as metodologias: 1) sequenciamento direto do exon III do gene GDF-8; 2) detecção de fragmentos de DNA em gel de agarose a 4% e 3) detecção de fragmentos em sequenciador automático de DNA. Na primeira metodologia testada, foi possível detectar com precisão os genótipos de todos os indivíduos, entretanto, esta metodologia foi a mais onerosa. A técnica de detecção de fragmentos em gel de agarose a 4% resultou em 100% de concordância com os genótipos obtidos destes mesmos animais por sequenciamento. Porém, em toda corrida eletroforética é necessário acrescentar amostras de DNA controle de animais previamente genotipados, para garantir uma melhor visualização dos genótipos esperados, reduzindo, assim, artefatos técnicos. Esta metodologia foi a que apresentou o menor custo. Com o desenvolvimento de um sistema poolplexing, a detecção de fragmentos em sequenciador automático apesar de ser uma metodologia mais onerosa e laboriosa do que a técnica de detecção de fragmentos em gel de agarose apresenta a grande vantagem de poder ser realizada junto com os testes de paternidade de bovinos que são realizados rotineiramente pelos produtores, apresentando, assim, a melhor relação custo/benefício. Por meio do sistema poolplexing, foram genotipados 346 touros jovens Senepol, dos quais 70 animais (20,23%) apresentaram o genótipo heterozigoto (+/del) e 276 apresentaram o genótipo homozigoto (+/+), sem a presença da deleção nt821. Os touros Senepol heterozigotos apresentaram maior área de olho de lombo (AOL) e menor perímetro escrotal (PE), ambas as características ajustadas para 550 dias. Para os outros fenótipos avaliados não foram observadas diferenças estatísticas significativas (p<0,05). Alguns desses efeitos causados pela mutação nt821 podem ser considerados vantajosos do ponto de vista do produtor, como AOL enquanto que outros são desvantajosos, como foi para PE. Neste sentido, cabe ao produtor à decisão de manter ou não este alelo na população.