Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lanes, Carlos Frederico Ceccon
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
Texto Completo: https://repositorio.furg.br/handle/123456789/11519
Resumo: Dissertação (mestrado)
id FURG_8d38f5e955daa6498b4bc6026e4cd76b
oai_identifier_str oai:repositorio.furg.br:123456789/11519
network_acronym_str FURG
network_name_str Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
repository_id_str
spelling Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)Paralichthys orbignyanusCaracterização do sêmenCriopreservaçãoTGMESperm characterizationCryopreservationSMGTDissertação (mestrado)O linguado Paralichthys orbignyanus é um importante recurso pesqueiro do oceano Atlântico Sul e é considerado uma espécie com grande potencial para a aqüicultura. A qualidade do sêmen é uma importante variável no manejo reprodutivo de espécies cultivadas, influenciando diretamente na produção de ovos viáveis. Além disso, o conhecimento das características físicas e químicas do sêmen é um importante fator no desenvolvimento de protocolos de resfriamento e criopreservação do sêmen. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o sêmen de P. orbignyanus ao longo da estação reprodutiva e utilizar essas informações para auxiliar no processo de criopreservação do sêmen e no desenvolvimento de um protocolo de transferência de genes mediada por espermatozóides (TGME). Na primeira etapa deste estudo, amostras de sêmen de linguados selvagens foram coletadas ao longo da estação reprodutiva. Através dos resultados obtidos foi verificado que a produção de espermatozóides e a motilidade progressiva aumentam significativamente à medida que a estação reprodutiva progride para o seu final (P<0.05). A motilidade progressiva dos espermatozóides durou em média 10 min, porém o tempo total de motilidade alcançou cerca de 100 min. Com relação ao pH, a osmolalidade e a concentração dos íons K+, Cl- e Mg+ dosados no plasma seminal, assim como, para o percentual e células móveis, nenhuma diferença foi verificada ao longo da estação reprodutiva. No meio da estação foi observada uma diminuição na concentração do íon Ca2+, a qual coincidiu com o menor tempo de motilidade dos espermatozóides. A concentração de Na+ foi aumentando ao longo dos períodos monitorados, atingindo a maior concentração no fim da estação reprodutiva (P<0,05). Na segunda parte deste estudo, a criopreservação do sêmen do linguado P. orbignyanus foi realizada. Para isso, foram testadas duas soluções crioprotetoras: uma contendo glicerol diluído numa solução a base de sais e outra contendo DMSO (dimetilsulfóxido) diluído numa solução à base de sacarose. Os dados de fertilização, eclosão e viabilidade larval demonstraram que as duas soluções utilizadas são eficientes na criopreservação do sêmen do linguado. Na última etapa deste estudo, alguns fatores limitantes na TGME em peixes foram avaliados e um protocolo de incorporação de DNA exógeno pelos espermatozóides foi desenvolvido. Os resultados obtidos nesta parte do trabalho demonstraram que o plasma seminal do P. orbignyanus apresenta uma forte atividade da enzima DNase. Entretanto, a atividade dessa enzima pode ser viii eliminada ou diminuída lavando o sêmen com soluções contendo EDTA. Além disso, foi verificado que uma quantidade de DNA exógeno similar ou inferior a 50 ng/106 espermatozóides deve ser usada na TGME em peixes. Por último, foi demonstrado que os espermatozóides do linguado P. orbignyanus são capazes de incorporar o DNA exógeno espontaneamente após a eliminação da atividade das DNases. Isto ficou evidente através da amplificação do DNA exógeno através de PCR. Desta forma, os resultados obtidos neste estudo podem auxiliar no manejo reprodutivo dessa espécie e, conseqüentemente, na implementação de programas de melhoramento genético tanto da forma clássica através da criopreservação do sêmen dos reprodutores que apresentam as melhores características fenotípicas, como através de técnicas modernas como a TGME.The Brazilian flounder Paralichthys orbignyanus is an important fishing resource from southern Atlantic coast of America and it has being considered for aquaculture. The sperm quality is an important variable in reproductive management of cultured species, influencing directly on the production of viable eggs. Moreover, the adequate knowledge of physical and chemical characteristics of the sperm is an important factor for developing short-term storage and cryopreservation protocols of sperm. The aim of this study was to characterize the P. orbignyanus sperm throughout the reproductive season to facilitate the sperm cryopreservation and to help in development of a sperm mediated gene transfer (SMGT) protocol. In the first part of this study, sperm samples were collected from wild flounders throughout the reproductive season. It was verified that the sperm production and the progressive motility of spermatozoa increased significantly towards the end of reproductive season (P<0.05). The mean time of progressive motility of spermatozoa was 10 min, however the total time of motility reached about 100 min. No difference was observed during the reproductive season in pH, osmolality and concentrations of K+ , Cl- e Mg+ measured in seminal plasma as well as in percentage of cells motility. In the middle of the breeding season was observed a reduction in Ca+2 concentration which has coincided with the lesser motility time of spermatozoa. The Na+ concentration increased throughout the season, reaching the highest concentration at the end of reproductive period (P<0.05). In the second part of this study, the cryopreservation of the flounder sperm was carried out. Two different cryosolutions were tested: glycerol ñ saline and DMSO - sucrose. The results of fertilization, hatching rate and larval viability demonstrate that both solutions are efficient in the cryopreservation of the flounder sperm. In the last part of this study, some limitant factors for exogenous DNA uptake by spermatozoa were evaluated and a SMGT protocol was developed. It was observed a strong DNase activity in P. orbignyanus seminal plasma. However, it was verified that DNase activity can be eliminated or decreased washing the sperm with EDTA-containing solutions. Moreover, it was verified that an amount of exogenous DNA similar or inferior to 50 ng/106 cells should be used in fish SMGT. At last, it was demonstrated that fish spermatozoa are capable to uptake exogenous DNA spontaneously after DNase activity elimination. This was evidenced through exogenous DNA amplification by PCR. The results of the x present study should help in reproductive management of this species and consequently in implementation of genetic improvement programs based not only in the sperm cryopreservation, but also using modern techniques such as SMGT.Marins, Luis FernandoLanes, Carlos Frederico Ceccon2024-05-21T21:34:21Z2024-05-21T21:34:21Z2008info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfLANES, Carlos Frederico Ceccon. Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae). 2008. 98 f. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Instituto de Oceanografia, Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, 2008.https://repositorio.furg.br/handle/123456789/11519porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FURG (RI FURG)instname:Universidade Federal do Rio Grande (FURG)instacron:FURG2024-05-21T21:34:22Zoai:repositorio.furg.br:123456789/11519Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.furg.br/oai/request || http://200.19.254.174/oai/requestopendoar:2024-05-21T21:34:22Repositório Institucional da FURG (RI FURG) - Universidade Federal do Rio Grande (FURG)false
dc.title.none.fl_str_mv Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
title Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
spellingShingle Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
Lanes, Carlos Frederico Ceccon
Paralichthys orbignyanus
Caracterização do sêmen
Criopreservação
TGME
Sperm characterization
Cryopreservation
SMGT
title_short Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
title_full Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
title_fullStr Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
title_full_unstemmed Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
title_sort Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae)
author Lanes, Carlos Frederico Ceccon
author_facet Lanes, Carlos Frederico Ceccon
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Marins, Luis Fernando
dc.contributor.author.fl_str_mv Lanes, Carlos Frederico Ceccon
dc.subject.por.fl_str_mv Paralichthys orbignyanus
Caracterização do sêmen
Criopreservação
TGME
Sperm characterization
Cryopreservation
SMGT
topic Paralichthys orbignyanus
Caracterização do sêmen
Criopreservação
TGME
Sperm characterization
Cryopreservation
SMGT
description Dissertação (mestrado)
publishDate 2008
dc.date.none.fl_str_mv 2008
2024-05-21T21:34:21Z
2024-05-21T21:34:21Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv LANES, Carlos Frederico Ceccon. Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae). 2008. 98 f. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Instituto de Oceanografia, Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, 2008.
https://repositorio.furg.br/handle/123456789/11519
identifier_str_mv LANES, Carlos Frederico Ceccon. Caracterização, criopreservação e manipulação genética do sêmen do linguado Paralichthys orbignyanus (Teleostei: Paralichthyidae). 2008. 98 f. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Instituto de Oceanografia, Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande, 2008.
url https://repositorio.furg.br/handle/123456789/11519
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
instname:Universidade Federal do Rio Grande (FURG)
instacron:FURG
instname_str Universidade Federal do Rio Grande (FURG)
instacron_str FURG
institution FURG
reponame_str Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
collection Repositório Institucional da FURG (RI FURG)
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da FURG (RI FURG) - Universidade Federal do Rio Grande (FURG)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1807384384475496448

Registros relacionados