Compara????o e valida????o de t??cnicas cl??ssicas e modificadas para estudos de potencial genot??xico de pept??deos utilizados na produ????o de radiof??rmacos
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2016 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Título da fonte: | Repositório Institucional do IPEN |
Texto Completo: | http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26378 |
Resumo: | O teste de frequ??ncia de micron??cleos (FMN) in vitro ?? uma das metodologias de escolha no desenvolvimento de testes de seguran??a toxicol??gica. Para o seu desenvolvimento no trabalho foram realizadas modifica????es da t??cnica convencional, relativas ao substrato de cultivo das c??lulas e ?? sua colora????o. As culturas celulares foram desenvolvidas diretamente nas l??minas e a colora????o foi realizada com laranja de acridina (AO) ao inv??s da colora????o segundo Giemsa. Foram utilizados controles positivos com potenciais clastog??nico (mitomicina C, benzo[a]pireno) e aneug??nico (colchicina), recomendados pela OCDE (Organiza????o para Coopera????o e Desenvolvimento Econ??mico). Como mol??culas-teste, foram utilizados compostos cuja associa????o a is??topos radioativos comp??em radiof??rmacos produzidos pelo IPEN. DOTATATO e Ubiquicidina foram testados em diferentes concentra????es proporcionais ??s concentra????es m??ximas utilizadas em pacientes adultos. Para tanto, foram realizadas dilui????es correspondentes ??s concentra????es 0,1X, 1X e 10X e culturas de c??lulas CHO-KI foram expostas a estas concentra????es para ensaios de citotoxicidade e FMN. Nenhuma das concentra????es induziu citotoxicidade significativa. Para an??lise de FMN, foram contabilizadas todas as c??lulas mononucleadas e multinucleadas at?? atingir a contagem de 1000 c??lulas binucleadas, com ou sem micron??cleos. Desta maneira foi poss??vel analisar a frequ??ncia de micron??cleos e o ??ndice de prolifera????o (CBPI). As concentra????es dos f??rmacos em teste (0,1X, 1X e 10X) n??o induziram agress??o ??s c??lulas. Nenhuma das concentra????es revelou citotoxicidade ou genotoxicidade, ou ainda qualquer altera????o no ciclo celular em compara????o aos controles, comprovando sua seguran??a conforme os par??metros exigidos pelas normas internacionais. Os resultados mostraram tamb??m uma boa concord??ncia entre a compara????o das leituras realizadas por analistas independentes, com pequenas discrep??ncias discut??veis, e boa correla????o com resultados obtidos com a colora????o convencional. Desta maneira as modifica????es realizadas na t??cnica de FMN mostraram potencial para cumprir todos os quesitos como teste pr??-cl??nico. |
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Daniel Perez VieiraOCAMPO, IVETTE Z.20162016-06-22T12:24:34Z2016-06-22T12:24:34Zhttp://repositorio.ipen.br/handle/123456789/2637810.11606/D.85.2016.tde-18042016-103044O teste de frequ??ncia de micron??cleos (FMN) in vitro ?? uma das metodologias de escolha no desenvolvimento de testes de seguran??a toxicol??gica. Para o seu desenvolvimento no trabalho foram realizadas modifica????es da t??cnica convencional, relativas ao substrato de cultivo das c??lulas e ?? sua colora????o. As culturas celulares foram desenvolvidas diretamente nas l??minas e a colora????o foi realizada com laranja de acridina (AO) ao inv??s da colora????o segundo Giemsa. Foram utilizados controles positivos com potenciais clastog??nico (mitomicina C, benzo[a]pireno) e aneug??nico (colchicina), recomendados pela OCDE (Organiza????o para Coopera????o e Desenvolvimento Econ??mico). Como mol??culas-teste, foram utilizados compostos cuja associa????o a is??topos radioativos comp??em radiof??rmacos produzidos pelo IPEN. DOTATATO e Ubiquicidina foram testados em diferentes concentra????es proporcionais ??s concentra????es m??ximas utilizadas em pacientes adultos. Para tanto, foram realizadas dilui????es correspondentes ??s concentra????es 0,1X, 1X e 10X e culturas de c??lulas CHO-KI foram expostas a estas concentra????es para ensaios de citotoxicidade e FMN. Nenhuma das concentra????es induziu citotoxicidade significativa. Para an??lise de FMN, foram contabilizadas todas as c??lulas mononucleadas e multinucleadas at?? atingir a contagem de 1000 c??lulas binucleadas, com ou sem micron??cleos. Desta maneira foi poss??vel analisar a frequ??ncia de micron??cleos e o ??ndice de prolifera????o (CBPI). As concentra????es dos f??rmacos em teste (0,1X, 1X e 10X) n??o induziram agress??o ??s c??lulas. 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No. of bitstreams: 0Disserta????o (Mestrado em Tecnologia Nuclear)IPEN/DInstituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP70acridine orangeheterocyclic compoundspeptidestoxicitymodified in-situ processesradiopharmaceuticalsproductioninterlaboratory comparisonscomparative evaluationsCompara????o e valida????o de t??cnicas cl??ssicas e modificadas para estudos de potencial genot??xico de pept??deos utilizados na produ????o de radiof??rmacosComparison and validation of classical and modified techniques for studies of genotoxic potential of peptides used in radiopharmaceuticals productioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisNS??o Pauloinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional do IPENinstname:Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN)instacron:IPEN21774T621.039.8 / O15cOCAMPO, IVETTE Z.16-06http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-18042016-103044/pt-br.php10835OCAMPO, IVETTE Z.:10835:810:SLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748http://repositorio.ipen.br/bitstream/123456789/26378/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51123456789/263782020-06-05 00:08:27.897oai:repositorio.ipen.br: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Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ipen.br/oai/requestbibl@ipen.bropendoar:45102020-06-05T00:08:27Repositório Institucional do IPEN - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN)false |
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