An??lise do perfil de express??o proteica da linhagem celular humana de adenocarcinoma renal, 786-O, submetida ?? radia????o ionizante

• Autor(a) principal: SILVA, EVELIN C.da
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30174
• topic: carcinomas; neoplasms; kidneys; urogenital system diseases; gene recombination proteins; animal cells; cell cultures; ionizing radiations; mass spectroscopy; radiation dose units; biological radiation effects

O carcinoma de c??lulas renais (CCR) representa 3% das neoplasias humanas e aproximadamente 90% das neoplasias renais e entre os tumores urol??gicos. O CCR ?? bastante resistente ?? radioterapia convencional. Entretanto, com o aparecimento de novas t??cnicas/equipamentos ?? possivel a aplica????o de doses com precis??o presevando-se os tecidos adjacentes. Para a verifica????o da express??o proteica em diferentes tecidos e fluidos corporais, foi utilizado o estudo prote??mico sob diferentes condi????es e / ou tempos. A espectrometria de massa permite a identifica????o e quantifica????o de milhares de prote??nas e pept??deos em fluidos biol??gicos ou c??lulas lisadas, sendo assim uma ferramenta poderosa para identifica????o de potenciais biomarcadores de doen??as. A finalidade deste trabalho foi analisar o perfil proteico das c??lulas de adenocarcinoma renal (786-0) ap??s a radia????o com doses que variaram de 2 a 10 Gy. Os dados foram tratados com o programa One-way ANOVA seguida do de Bonferroni. Pelo ensaio de clonogenicidade definiou-se a dose de 8 Gy como a ideal estudos. A extra????o das prote??nas citoplasm??ticas foi realizada com o kit de extra????o do proteoma subcelular PE e a quantifica????o das prote??nas feita pelo m??todo de Lowry. A integridade das prote??nas foi analisada por SDS-PAGE e a solu????o proteica foi verificada em LTQ Orbitrap. Os resultados gerados foram analisados pelo servidor MASCOT para a busca de pept??deos. A an??lise por espectrometria de massa foi poss??vel identificar 44 prote??nas nas amostras n??o irradiadas - e 87 das amostras irradiadas. Nas amostras n??o irradiadas a distribui????o dos grupos funcionais foi de s??ntese proteica 46,66%; Metabolismo energ??tico 16,66%; Migra????o e prolifera????o 16,66%; Antioxidantes 3,33%. No grupo irradiado s??ntese proteica 35,89%; Metabolismo energ??tico 20,51%; Migra????o e prolifera????o 20,51%; Antioxidantes 5,12%; Chaperonas moleculares 5,12% e Endopeptidases 5,12%. Em seguida, analisou-se o espetro de as sequ??ncias com escores acima de 40. Nas amostras irradiadas encontrou-se: ENO1 (47 kDa); A VIM (53 kDa)/ HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cofilina-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1/ HSP27. Deste grupo, entendemos que a subunidade alfa do proteassoma - tipo 1 (PSMA1), que possui uma atividade molecular de endopeptidase, seja um alvo interessante para estudos posteriores.