Clonagem, express??o, purifica????o e caracteriza????o estrutural da regi??o AP-1 da oncoprote??na Jun

• Autor(a) principal: SILVA, FLAVIO S.
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/11802
• topic: proteins; apoptosis; cloning; purification; ribosomes; tumor cells; neoplasms; mass spectroscopy

A prote??na jun ?? um dos principais integrantes do complexo AP-1 e est?? envolvido nos processos inflamat??rios, diferencia????o, apoptose e migra????o celular. Esta prote??na pode formar homod??meros e heterod??meros por meio da dimeriza????o que ocorre pelo s??tio de sequ??ncias de leucinas. Existem evid??ncias de que a prote??na jun pode ser inibida pela prote??na RPL10 mediante a liga????o destas prote??nas, no mesmo s??tio de sequ??ncias de leucinas no n??cleo celular, parando a progress??o de tumores. O objetivo deste trabalho foi expressar, isolar e caracterizar a regi??o de liga????o das sequ??ncias de leucinas (regi??o AP-1), para estudos posteriores de liga????o com a prote??na RPL10. O cDNA para prote??na jun foi amplificado por PCR e clonado nos vetores de express??o pET 26b(+), pET 28a-c(+) e p1813 e expressa em E.coli BL21 (DE3). A prote??na expressa em vetor pET28_AP1 foi eficientemente purificada pela t??cnica de cromatografia de afinidade a ??ons met??licos, por possuir uma sequ??ncia (poli)histidina que facilitou a purifica????o, apresentando um excelente grau de pureza. A identidade da prote??na foi confirmada atrav??s de an??lise feita por western blotting e dot blotting e tamb??m por analise por espectrometria de massas.