Produ????o e estudo de atividade antiangiog??nica de prote??nas de fus??o endostatina-dom??nio BH3 das prote??nas pr??-apopt??ticas PUMA e BIM

• Autor(a) principal: SILVA, NATAN V. da
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26940
• topic: angiogenesis; blood vessels; carcinogenesis; growth factors; neoplasms; tumor cells; collagen; resins; polysaccharides; protein engineering; reticuloendothelial system; counting techniques; molecular biology; biotechnology; medical examinations; medical surveillance; diagnosis

A endostatina (ES) ?? uma prote??na inibidora da angiog??nese, com a????o espec??fica sobre c??lulas endoteliais em prolifera????o, utilizada para tratamento de tumores s??lidos. No entanto, o elevado efeito antitumoral da ES observado em animais n??o ?? reproduzido em humanos. Com o intuito de potencializar a efic??cia terap??utica da ES, produzimos duas prote??nas h??bridas com dois dom??nios funcionais. O primeiro dom??nio ?? a ES, que apresenta especificidade por c??lulas endoteliais ativadas, dirigindo estas prote??nas de fus??o ??s c??lulas endoteliais em prolifera????o, promovendo sua internaliza????o e seu efeito inibit??rio. Como segundo dom??nio funcional utilizamos os dom??nios BH3 pr??apopt??ticos de duas prote??nas BH3-only com o objetivo de promover a libera????o de citocromo C e desencadear o processo de apoptose, aumentando a a????o antiangiog??nica da ES. Neste trabalho, foram desenhadas duas prote??nas de fus??o que cont??m o dom??nio BH3 das potentes prote??nas pr?? apopt??ticas PUMA e BIM (ES-PUMA e ES-BIM), que deveriam apresentar efeito antiangiog??nico potencializado em rela????o ?? ES selvagem. A inser????o dos fragmentos de DNA codificantes para os dom??nios BH3 de PUMA e BIM no vetor contendo o gene da ES (pET-ES) foram realizadas por mutag??nese s??tiodirigida. Estas prote??nas de fus??o recombinantes foram expressas como corpos de inclus??o em E.coli, renaturadas utilizando processo que utiliza alta press??o e purificadas em resina de afinidade por heparina. O tratamento de c??lulas endoteliais com as prote??nas ES-PUMA e ES-BIM n??o levou ?? queda de viabilidade em ensaio de MTS ou de apoptose avaliado por citometria de fluxo, em compara????o com os resultados obtidos pelo tratamento com ES.