Uso da tomografia por emiss??o de p??sitrons (PET) para identifica????o precoce de met??stases e investiga????o da efic??cia terap??utica da combina????o p19Arf e Interferon-Beta em melanoma murino

• Autor(a) principal: FREIRE, MARIA R.V.B.
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Título da fonte: Repositório Institucional do IPEN
• Texto Completo: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/29192
• topic: neoplasms; melanomas; metastases; nuclear medicine; preventive medicine; immunotherapy; herpes simplex; nucleoproteins; interferon; targets; fluorine 18; gamma detection; positron computed tomography; emission computed tomography

O melanoma maligno ?? um tipo de c??ncer com grande risco de produzir met??stases e com altas taxas de mortalidade resultantes de diagn??sticos tardios e falta de tratamentos eficazes. Ao longo dos ??ltimos anos, a terapia g??nica voltada para o c??ncer e o desenvolvimento de m??todos capazes de visualizar processos moleculares e celulares ao longo da terapia, tem recebido especial aten????o. Diante deste quadro, nossos objetivos foram utilizar o sistema de Tomografia por Emiss??o de P??sitrons (PET) para diagnosticar precocemente tumores e investigar a efic??cia terap??utica de uma nova imunoterapia em um modelo animal de melanoma metast??tico. Visando atingir esses objetivos, padronizou-se a s??ntese e realizou-se o controle de qualidade do 9- [4-18F-fluoro-3-hidroximetil-butil) guanina, [18F] FHBG, considerado o padr??o-ouro em estudos cl??nicos, para acompanhamento de terapia g??nica por PET. M??todos: Sintetizou-se o [18F] FHBG, por substitui????o nucleof??lica tipo 2 do precursor tosilato com [18F-] fluoreto de pot??ssio /Kryptofix 2.2.2, seguido de desprote????o com HCl 1 M e purifica????o por HPLC. A identidade qu??mica, pureza radioqu??mica e atividade espec??fica do [18F] FHBG foram determinadas por Cromatografia L??quida de Alta Efici??ncia (CLAE). Introduziu-se o gene de timidina quinase (TK) com o vetor retroviral pCL-TK nas linhagens B16F10 (melanoma murino) e LLC (carcinoma de pulm??o murino). Os estudos de capta????o in vitro dos radiotra??adores [18F] FHBG e [18F] FDG foram realizados nas linhagens celulares tumorais murinas transduzidas ou n??o com a prote??na TK. Para os estudos in vivo, camundongos C57BL6 previamente inoculados intravenosamente com c??lulas de melanoma expressando a enzima TK, foram imageados subsequentemente utilizando os radiotra??adores [18F] FDG e [18F] FHBG. A efic??cia da imunoterapia foi testada em modelo profil??tico e terap??utico animal de melanoma metast??tico. Resultados: O tempo de s??ntese total do [18F] FHBG variou entre 80-150 minutos. O rendimento radioqu??mico variou entre 1-4%, (n = 19) decaimento corrigido. A pureza radioqu??mica foi superior a 99% e a atividade espec??fica variou entre 0,14GBq/??moL-0,21GBq/??moL. Com a introdu????o do gene timidina quinase (TK), obtiveram-se as linhagens rep??rter B16F10-TK e LLC-TK, para os estudos in vitro. As c??lulas B16F10 e LLC, expressando GFP foram utilizadas como linhagens controles. Estudos in vitro com o [18F] FHBG revelaram uma capta????o cerca de 4 vezes maior em c??lulas que expressam TK (B16-TK e LLC-TK) em compara????o com as c??lulas controle GFP. O [18F] FDG apenas captou cerca de duas vezes mais em c??lulas TK do que em c??lulas que expressam GFP. A detec????o de tumores em modelo animal de met??stase pulmonar com o [18F] FDG ocorreu a partir de 15 dias do estabelecimento das les??es. No entanto, nos estudos in vivo com [18F] FHBG, houve capta????o apenas na regi??o intestinal, durante as tr??s semanas em que os animais foram acompanhados. A imunoterapia com c??lulas tratadas pela combina????o de p19Arf e IFN??, em camundongos C57BL6 com met??stase pulmonar, conferiu redu????o do tamanho dos focos metast??ticos aos animais tratados. Conclus??es: Neste trabalho padronizou-se a s??ntese manual do [18F] FHBG, o qual foi avaliado em estudos in vitro e in vivo. Os estudos in vitro confirmaram a especificidade do [18F] FHBG no monitoramento da express??o de HSV1-tk em linhagens celulares. No entanto, o [18F] FHBG n??o se acumulou nas les??es metast??ticas in vivo e estudos posteriores ser??o necess??rios para uma melhor caracteriza????o utilizando o [18F] FHBG. O resultado do tratamento combinado de p19Arf e IFN?? foi promissor para o tratamento de les??es metast??ticas.